乙型脑炎病毒的分离鉴定及其在microrna水平上与pk-15细胞的相互作用研究

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1、８５５３２０１２３５０１分类号Ｓ．学号Ｓ、，ｙＶ四川巧化大学■－ｒｉ＞硕ｄｒ学位论文乙型脑炎病毒的分离鉴定及其在ｍｉｃｒｏＲＮＡ水平上与ＰＫ－１５细胞的相互作用研究、，、‘、片蔡雨函＇■‘．Ｖ＇＞—，、＇’叩指导教师徐志文教授Ｊ＇Ｃ：７．．．．二；、一＊学科专业预防兽医学Ｖ研巧方向动物传染病病原分子生物学．－、＇■＇一■－衣■一：Ａ＇．？？义、＊’，．？Ａ、．、＼．．Ｖ、．＊Ｉ＂？？＇－？－＾Ｋ／－＇

2、＼‘＼、；＂Ｖ２０巧年＞＼６月、。？？：＞、二？＞’＼／’，公■■－、？．＇—＂■’＇－／＇音‘尸是’－—－？＞－．＇－一Ｔｂ、产．，，声／‘／Ｖ■■、＞乂．Ｓ．■．＇．＇－．‘．，于．Ｊ，．ＣａｔｅｇｏｒｙＳ８５５．３ＮｕｍｂｅｒＳ２０１２３５０１Ｓｉｃｈｕａｎ乂ｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｇｙ，ＭａｓｔｅｒｓＤｅｇｒｅｅＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉ贷ｃａｔｉｏｎｏｆＪａｐａｎｅ

3、ｓｅｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓｖｉｒｕｓａｎｄｔｈｅｒｅｓｅａｃｈｏｆ－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈＰＫ１５ｃｅｌｌｓａｔｔｈｅｍｉｃｒｏＲＮＡＬｅｖｅｌＢｙ：ＣａｉＹｕｈａｎＤｉｒｅｃｔｅｄｂｙ：Ｐｒｏｆ．ＺｈｉｗｅｎＸｕＭａｏｒｉＰｒｅｖｅｎｔｉｖｅＶｅｔｅｒｉｎａｒｍｅｄｉｃｉｎｅｊｙＣｈｅｎｇｄｕＳｉｃｈｕａｎＪｕｎｅ２０１５，论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体

4、已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学一或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。＂研巧生签名：速於（５年＾月５曰絮吊）１（关于论文使用援巧的声明、，本人完全了解四川农业大学有关保留使用学位论文的规定即：学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业，可Ｗ采用影印大学可用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。＼：论文不保密；。ａ本论文保密，在年解密后

5、适用本授权。（３（＿＿＂＂（请在上□内划Ｖ）■研巧生签名；雨击从５年ｉ月化曰絮导师签名：月＾日中文摘要一流行性乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）是种危害严重的人畜共患病病原，属于黄病毒。，科黄病毒属该病毒严重威胁人类健康感染人后入侵中枢神经系統，造成死亡或者留下严重的神经系统盾遗症。同时它可Ｗ感染猪群，造成种猪繁殖障碍，严一重制约养猪业的发展，也造成巨大的经济损失。ｍｉｃｒｏＲＮＡｍｉＲＮＡ作为种在（）转录后水平发挥基因调控功能的非编码小分子ＲＮＡ，在细胞生长、分化、调亡和代谢等生命过程中发挥着不可替代的作用，并且在病毒感染入侵及宿主细胞的－抗病毒方

6、面起着重要的调节作用。而目前对于ＪＥＶ在ｍｉＲＮＡ水平上与ＰＫ１５细胞相互作用的研究暂无报道，相关研巧对于深入了解祀Ｖ的致病机制及ＪＥＶ的防控十分重要。本研巧具体内容如下；通过观察细胞病变（ＣＰＥ）情况及ＰＣＲ检测－２１，利用ＢＨＫ细胞从四川流－３－－－产死猪胎样品中成功分离出株ＪＥＶ，分别命名为ＪＥＶＳＣ１株、圧ＶＳＣ２株与ＪＥＶ－ＳＣ－３株，基因分型研究显示３株病毒株均为基因田型，其ＴＣ肛５０分别为－ｗ－５ｉ２＂。－－１０Ｖ０．０２５ｍｌ、１０／０．０２５ｍｌ及Ｉ（Ｈ／〇．〇２５ｍｌ选取ＪＥＶＳＣ１株为代表株分别－－１ＶＰＫ５感染ＢＨＫ２、ｅｒ

7、ｏ和１细胞后，观察ＣＰＥ及利用本研究建立的巧光定量一ＨＰＣ民方法分别绘制其在这Ｈ种细胞中的歩生长曲线。结果显示，ＪＥＶ在这Ｅ－种细胞中均能增殖且能产生不同程度的ＣＰ：ＪＥＶ感染ＢＨＫ２１细胞后３化开始ｅｒｏ－－出现Ｃ距，而感染Ｖ、ＰＫ１５细胞后４８ｈ开始出现ＣＰＥ；ＪＥＶ感染ＢＨＫ２１￣￣？细胞后〇ｈ２４ｈ増长缓慢，２４ｈ４化呈对数増长，４８ｈ７２ｈ增长速度减缓，６０ｈ达ｅ￣￣到最大值，随后病毒含量逐步下降；感染Ｖｒｏ细