猪乙型脑炎病毒sc株的分离鉴定及其部分生物学特性研究

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1、万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：矽烨年占月／沙日，关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或

2、扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。f圈本论文不保密。口本论文保密，在一年解密后适用本授权。(请在以上口内划“4”)研究生签名：导师签名：泸，5f年多月／≥目Ⅵ夕吖年易月，Z,-I习、易秘弧万方数据中文摘要猪乙型脑炎又称之为日本乙型脑炎(Japaneseencephalitis)，是由日本乙型脑炎病毒(．1apaneseencephalilisvirus，JEV)引起的一种人畜共患急性传染病。JEV感染主要引发猪繁殖障碍疾病，接种猪乙型脑炎病毒灭活疫苗能有效预防和控制该病。本研究从

3、疑似猪乙型脑炎的临床病料中分离到1株JEV病毒，对其进行了生物学鉴定和适应性培养研究，并使用所培养的细胞适应株作为免疫原成功制备了JEV的兔源高免血清。取流产胎儿脑组织经处理后接种BHDS31细胞，每日观察细胞病变，连续观察5天，然后连续盲传。JEV分离株盲传至第6代开始产生细胞病变，接种细胞36h观察到轻微的细胞病变，48h时，细胞病变达80％。针对JEV的E基因设计特异性引物，对盲传后的病毒液进行JEV的检测。结果表明使用所建立的JEVRT-PCR检测方法对产生细胞病变的分离株进行检测扩增出特异性条带，由此表明使用BHK21细胞成功分离到一株JEV病毒

4、，将其命名为JEV．SC株。将检测为阳性的JEV继续传代使其适应BHK21细胞，待出现细胞病变后通过蚀斑实验对所分离的病毒进行纯化。对纯化后的病毒以及不同代次的JEV分离毒株进行TCID50的测定，分析不同代次毒株在BHK．21细胞上的适应性。并将其接种VERO细胞，比较JEV分离株在不同细胞上的增值特性。然后使用在BHK21上稳定传代的JEV分离株作为抗原，免疫家兔，制备兔源高免血清。使用蚀斑实验对JEV—SC株进行纯化并连续传代，连续传代至10代后可以观察到稳定的细胞病变，测得JEV—SC株的TCID50为107．21／ml。将JEV．SC株分别接种V

5、ero细胞和BHK一21细胞，结果显示Vero细胞接种JEV—SC株后12h～48h出现细胞病变，随着时间的延长细胞病变数量逐渐增加，接种84h后病变细胞达到90％。BHK21细胞接种后24h可以观察到细胞病变，病变特征与VERO细胞类似，接种细胞后约60h病变细胞达到90％。以上结果表明JEV—SC株在BHK21细胞上病变较VERO细胞明显，更适于该病毒的培养。将JEV．SC株接种BHK21细胞后不同时间收集培养上清测定上清中病毒含量，结果显示病毒滴度在8h～40h期间呈上升趋势，在40h～64h期间趋于稳定且在56h左右达到最大值，㈣笋舢1～删1～㈣呈

6、删1～ⅢO～㈣J～万方数据64h以后病毒滴度开始下降。使用适应性培养的JEV-SC株作为免疫原免疫家兔后成功获得了JEV兔源高免血清，琼脂糖扩散实验证实所制备的高免血清效价为1：32。关键词：猪乙型脑炎病毒；分离；鉴定；适应性培养；万方数据Isolation，IdentificationandprimaD"BiologcalCharacterizationofPorcineEncephalitisVirusSCStrainMasterofVeterinaryWangYun(MasterofVeterinary)DirectedbyXuZhiwen(Prof

7、essor)(SichuanAgricultureUniversity，Ya’an，Sichuan，P．R．China，625014)AbstractPorcineencephalitisisalsoknownasJapaneseencephalitiswhichisanacuteinfectiouszoonotic．JapaneseencephalitisvirUSistheantigens，mainlycauseporcinereproductivedisorders，vaccinatedswineJapaneseencephalitisvirusva

8、ccinecaneffectivelypreventandcont