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时间:2019-03-13
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1、r:./.V^{奶'&-.?户霉iJ1-'瘍cIv.、..^/.vW願:含;lf考Ki.奈-Ji蓮-r-落.式:公V:o:.1-iL-3-一^巧.专./^a-?7:/XV餐書'v#、^#V:^'4'卓^!^绵藏及w斗襟.,專.却>..化..养健.:I%%.J4.y.;殘袭,,-'為為.乂锭f,一為-為遺参V''f辱屬歡/>1.祭-/p-..、‘:之‘V攀L^,論*m衣;^勺巧■,沪..|善賓?:孽..起.r:.台.'、二..|、讓一公.:4'女?D樣\袭读7'、一.".巧'3J,-'""虐>餐.7潜%,、,.
2、T‘乂?H’'観'心;續衣-.、>卷、.‘心.之匈心^.V',r趕\占1:^'■.1崖一豪',-;''..??.;屯i.',I囊^;^^运'^T:::-'窜'与^',U:#曼r;.,/.’'苗'S'々.14分类号S831.2密级公开UDC硕±学位论文兰黄鸡体细胞重编程及巧SC培养体系的优化周学亮学科专业动物遗传育种与繁殖指导教师卢克焕教授陆阳清研究员论文答辩日期2015年5月20日学位授予日期答辩委员会主席石德顺研究员广西大学学位论文原创性和使用授权声
3、明本人声明所呈交的论文,是本人在导师的指导下独立进行研究所取得。的研究成果除已特别加标注和致谢的地方外,论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果,也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料一。与我同工作的同事对本论文的研巧工作所做的贡献均己在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品,知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权,目P;学校有权保存并向国家有关部口或机构送交学位论文的复印件和电子版,允许论レ文被查阅和借阅,可ッ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进
4、行检索和传播,可レッ采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于:□保密,在年解密后适用授权。保密。""请在上相应方框内巧V()、论文作者签名?占:句日期:指导教师签名日期5W7:作者联系电话;ir子嶋H黄鸡体细胞重编程及iPSC培养体系的优化摘要诱导多能干细胞(Inducedpluripotentstemcell,巧SC)是通过将外源多能因子导入到已分化的细胞中,促进多能基因表达,使细胞重编程而获得一on多能性的类细胞。巧SC与ESC(EmbryicStemCell)类似,具有分化成各种类型
5、细胞和H个化层的潜能。相比分离胚胎干细胞牺牲脏胎的局限i性,PS技术可诱导多种来源的细胞,给研究人员提供了更多的研究材料,并规避了破坏胚胎等伦理问题。巧SC技术应用在禽类物种上,可W促进珍稀鸟类和优良种禽的保种育种。本论文研究主要从广西兰黄鸡体细胞出发一诱导;?5。并优化1?5(:的培养系统,为建立套^^干细胞为基础的家禽保。种育种平台奠定基础研究主要分为H部分,分别为分离H黄鸡体细胞、诱导重编程王黄鸡脏成纤维细胞、鸡iPSC的培养条件的优化,结果如下;(1)H黄鸡体细胞分离。本实验分离H黄鸡幼鸡羽毛细胞,采用不同种类培养液、膀蛋白酶不同时间消
6、化、不同浓度血清培养液分离培养羽毛细胞。发现膜蛋白酶消化10分钟,DMEM/F12培养液培养可^^分离到羽毛细胞,但羽毛细胞传代后增殖速度减慢趋向死t。分离并得到H黄鸡幼鸡必、肝、肌肉组织、鸡胚成纤维细胞。(2)H黄鸡胚成纤维细胞诱导重编程。采用含有0ct4、Sox2、Klf4、-Lin28、cMc多能转录因子Pibac转座子脂质体法转染CEF细胞,转染yggy培养。10天后没有出现细胞克隆使用含有不同Sox2、Lin28、Oct4、Nanog、I--MKcc和lf4多能因子组合的慢病毒载体感染C邸细胞,发现Sox2、Lin28、yOc--
7、t4、NanoMc、K_lf4组合均可实现g组合,Sox2、Oct4、cy细胞重编程,诱导出碱性憐酸酶阳性克隆。(3)鸡巧SC的培养系统的优化。通过配制不同营养成分的培养液,改变培养液中添加BRL条件培养液比例、FGF浓度、LIF浓度,对比BRL、STO、M即饲养层,对比昆明小鼠和1C民小鼠MEF饲养层,对比丝裂霉素C处理和物理福射处理MEF饲养层,培养并观察鸡巧SC的生长状态。实验结果发现1C民小鼠MEF细胞经丝裂霉素C处理制备饲养层适合鸡iPSC生长,1C民小
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