骨保护素对破骨细胞及其前体黏附结构和融合的影响

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1、＇八已［Ｍ２０４７ＪｌＩ？ｔ来皱＿據叫大聲ＹＡＮＧ／ＨＯＬＩＵＮ＂ＩＶＥＲＳＩＴＹ―‘；‘，巧皆博壬学化４＾丈賓，名骨保护素对破骨细胞及其前体黏附结构和融合的影响■＼：‘為，ｖ去言张，＇；謹剩连权■—赵鸿雁苗，錐，；巧議ｙ辨哪－巧壤Ｕ指导教师姓名：刘宗平教授，扬州大学，江苏扬州，２２５００９乎连＇中请学位级别：博壬学科专业名称：略床兽医学论文提交日期：２０１５年４月论文答辩日期：２０１５年６月学位授予单位：扬州大学学位授予日期：２０１５年６月

2、答辩委员会主席‘：＾马，＇，；知对取々１：＞５々识？’换矣扛兵护，為隸禱链２＇＂５年＂鑛骨保护素对破骨细胞及其前体熱附结构和融合的影响Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆ６ｓｔｅｏｐｒｏｆ：ｅｇｅｒｉｎｏｎｔｈｅｐｅｒｉｐｈｅｒａｌａｄｈｅｓｉｖｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓａｎｄｆｕｓｉｏｎｏｆｒｅｏｓｔ：ｅｏｃＩａｓｔｓ（ｐ）研究生；赵鸿雁导师；刘宗平教授Ｘ｜备；专业｜床兽區学资助项目；国家自然科学基金（３１１７２３７３，３１３７２４９５）江苏省普通高校研究生科研创新计

3、划资助项目（２０１３）扬州大学２０１５年６月赵鸿雁：骨保护素对破骨细胞及其前体黏附结构和融合的影响１＿骨保护素对破骨细胞及其前体黏附结构和融合的影响中文摘要一骨内稳态失衡是动物主要的健康问题之。破骨细胞的分化和活化，在健康动物及患病动物骨重塑中起着至关重要的作用。破骨细胞具有骨吸收活性，由单核细胞巨隨细胞／一单核细胞谱系的造血前体细胞融合形成，。破曾细胞通过伪足小体种特异性的黏附结构，Ｆ－ａｃ附着在细胞外基质上。伪足小体可形成ｔｉｎ环，类似于进行胥吸收的破骨细胞形成的环状封闭带。曾保护素（ＯＰＧ）和

4、核因子ｋＢ受体激活剂（ＲＡＮＫ）都是肿瘤坏死因子受体（ＴＮＦＲ）超家族成员，通过和ＲＡＮＫ配体（ＲＡＮＫＬ）竞争性地结合，调控破骨细胞形成和功能。ＲＡＮＫＬ通过激活ＲＡＮＫ，促进破骨细胞分化；而ＯＰＧ连接至ＲＡＮＫＬ，抑制破骨细胞形成一。己有研究发现了ＯＰＧ作用于破骨细胞分化、融合及黏附的些重要细节。但送些研究主要集中在编码破骨细胞特异性标志物，潜在的融合因子和黏附相关调控因子基因的表达，通过体外阻断，或过表达方式來研究，ＯＰ。因此Ｇ抑制破骨细胞分化、融合和黏附的许多重要分子机制仍不明确ｎ－。本研究Ｗ２５ｇ／ｍＬ

5、ＭＣＳＦ和３０ｎｇ／ｍＬＲＡＮＫＬ诱导ＲＡＷ２６４．７细胞分化形成的破骨细胞为研究对象，在分化过程中添加不同浓度ＯＰＧ进行处理，ＲＴＣＡ）、免疫印迹法ｅｓｅｒｎｂｏ通过形态学鉴定、实时细胞动态分析（（Ｗｔｌｔ）等技一术手段，探索ＯＰＧ对破骨细胞黏附结构和融合的影响，，揭示相关调控机制为进步阐明ＯＰＧ对破骨细胞形成及功能的抑制作用提供了理论依据。研究内容如下：１．ＯＰＧ对不同分化阶段破骨细胞的形成及功能的影响为了研究０ＰＧ对不同分化阶段破骨细胞的黏附及活性的影响－，本实验采用ＭＣＳＦ和ＲＡＮＫＸ处理ＲＡＷ２６４．

6、７细胞，培养１、３、５、７ｄ后，各组分别添加８０ｎｇ／ｍＬＯＰＧ作用２４ｈ。抗酒石酸酸性麟酸酶（ＴＲＡＰ）染色和免疫英光检视ｉｊ破骨细胞分化和點附能力的变化，民ＴＣＡ监测细胞生长曲线变化，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＴＲＡＰ、ＲＡＮＫ、ｉｎｔｅｇｒｉｎｐ３、ｍａｔｒｉｘｍｅｔ組ｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ９（ＭＭＰ９）、ｏａｔｈ巧ｓｉｎＫ、ｃａｒｂｏｎｉｃａｎｈｙｄｒａｓｅＩＩ（ＣＡＩＩ）及＾－－－ｖｅｓｉｃｕｌａｒｔｅＨＡＴＰａｓｅＡ１（ＶＡＴＰａｓｅＡｌ）蛋白表达量的。结果显示ｙｐ变化，ＯＰＧ处理显

7、著增强分化初期细胞（Ｉｄ）的存活、增巧及黏附能力，并促进ＲＡＮＫ和ｉｎｔｅｒｉｎ３３表达量ｇ｜显著增高＜－（ｐ＾０１）。相反，和对照组相比，ＯＰＧ抑制成熟的破骨细胞（３７ｄ）的分化及黏附结构的形成，并显著降低了ＴＲＡＰ、ＲＡＮＫ、ｉｎｔｅｇｒｉｎｐ３、ＭＭＰ９、ｃａ也ｅｐｓｉｎＫ、ＣＡＩＩＨ扬州人巧障十学位论文－ＡＴＰａｓｅ＜及ＶＡ１标志性蛋白的表达水平（０．０１）。说明ＯＰＧ对于破骨细胞分化不同阶段Ｐ的生物效应是有差异的，，促进破骨细胞前体的黏附和存活抑制各阶段破骨细胞的分化，并降低分化至中末期的成熟的

8、破骨细胞活性。２．ＯＰＧ对破骨细胞黏附结构的影响及调控机理为了揭示ＯＰＧ对破骨细胞黏附结构、黏附相关蛋白表达及分化的影响，本实验采用－Ｃ