贵州16个血友病a家系的基因诊断及fⅷ基因内3个snp位点的诊断意义

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1、中图分类号：R394.3.单、位代码：10660UDC：616-092学号：10660S120153学科专业代码：100208密级：公开/…贵阳医学•院2015届硕士学位论文(科学学位//一贵州16个血友病A家系的基因诊斷及F1基因内3个SNP位点的诊断意义Studyoilgeneticdiagnosisfor16hemophiliaAfaniiliesfromGuizhouProvinceandthediagnosticsignificanceofthreeSNPswithinFVfflgene研究生:吴娴导师:杨国珍教授黄盛文主任医师年级:2012级.■1一业:临床检验诊

2、断学二〇一五年五月贵阳医学院学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。除与外单位合作项目将予以明确方式规定外，本研究已发表与未发表成果的知识产权均归属贵阳医学院。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名（手写）：矣辦导师签名（手写）_如'5年夕月2}日丨少年厂月叫日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有

3、关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人技权贵阳医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请在以下相应方框内打“V”）：1、保密□，在_年解密后适用本授权书。加5年5月二f日^r月E中图分类号：R394.3单位代码：10660UDC：616-092学号：10660S120153学科专业代码：100208密级：公开贵阳医学院2015届硕士学位论文（科学学位）贵州16个血友病A家系的基因诊断及FⅧ基因内3个SNP位点的诊断意义Studyongeneticdiagnos

4、isfor16hemophiliaAfamiliesfromGuizhouProvinceandthediagnosticsignificanceofthreeSNPswithinFⅧgene论文作者：吴娴指导教师：杨国珍教授黄盛文主任医师申请学位：医学硕士培养单位：医学检验学院学科专业：临床检验诊断学研究方向：遗传病基因诊断研究起止日期：2013年9月至2015年2月论文评阅人：盲评答辩委员会主席：余红岚论文答辩日期：2015年5月20日二〇一五年五月贵州16个血友病A家系的基因诊断及FⅧ基因内3个SNP位点的诊断意义专业：临床检验诊断学硕士研究生：吴娴导师：杨国珍黄盛文【摘

5、要】目的：由于常用于血友病A（HemophiliaA，HA）间接基因诊断的多态位点对HA家系的诊断率有限，本研究通过对FⅧ基因内5个单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphism，SNP）位点的杂合度进行分析，以寻找新的可用于HA家系基因诊断的多态位点。方法：收集16个无血缘关系的HA家系成员及3例家系不全的HA患者血样用于家系连锁分析及基因诊断；50例汉族正常女性血样用于5个SNP位点的多态性分析。采用血浆凝固法(一期法)进行凝血因子Ⅷ活性(FVIII：C)检测。对重型患者采用长距离PCR（LD-PCR）检测FⅧ基因内含子22倒位；双管多重PCR扩增

6、技术检测内含子1倒位。通过连锁分析的方法将常用的BclI、HindⅢ和Stl4(DXS52)3个多态位点用于HA家系的间接基因诊断，其中BclI及HindⅢ位点采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PolymeraseChainReaction-RestrictFragmentLengthPolymorphism，PCR-RFLP)方法进行分析，Stl4(DXS52)位点采用聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction，PCR)进行产物分析。选取FⅧ基因内在亚洲人群中杂合度较高且多态位点只具有二等位基因的5个SNP位点（rs1509787、rs1800291、

7、rs3861554、rs1470586、rs6649625），运用RFLP方法对50例汉族正常女性的这5个位点进行检测，把杂合度较高的SNP位点用于HA家系的间接基因诊断。结果：（1）根据FVIII：C活性检测结果，19例先证者中有4例为重型（FVIII：C活性<1%），10例为中型（FVIII：C活性：1%-5%），5例为轻型（FVIII：C活性：5%-25%）。（2）4例重型HA患者中有1例为内含子22倒位，检出率为25%（1/4），未检出内含子1倒位。（3）联合应用BclI、Stl4(