谷氨酰胺对饥饿小鼠小肠乳脂肪球上皮生长因子e8表达的影响

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1、谷氨酰胺对饥饿小鼠小肠乳脂肪球上皮生长因子E8表达的影响Effectofglutamineonintestinalmilkfatglobule–EGFfactor8expressioninhungrymice作者姓名：张利娟指导教师：杜隽铭学科专业：外科学答辩日期：2015年5月11日研究生学号：1127229345二零一五年四月上海交通大学谷氨酰胺对饥饿小鼠小肠乳脂肪球上皮生长因子E8表达的影响作者姓名：张利娟指导老师：杜隽铭导师组成员：王英伟主任医师王颖研究员赵璇副主任医师江来副主任医师毛燕飞主治医师学科专业：外科学（重症监护）研究方向：乳脂肪球上皮生长因子E8在

2、饥饿小鼠小肠黏膜损伤中的作用申请学位：硕士答辩日期：2015年5月11日培养单位：上海交通大学医学院附属新华医院二零一五年四月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复

3、印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海交通大学医学院硕士学位论文谷氨酰胺对饥饿小鼠小肠乳脂肪球上皮生长因子E8表达的影响摘要目的：乳脂肪球上皮生长因子E8（MFG-E8）是由巨噬细胞和树突状细胞合成分泌的一种可以与磷脂酰丝氨酸及整合素受体结合的糖蛋白。研究指出MFG-E8在维持肠上皮稳态、促进肠黏膜损

4、伤修复中可发挥重要作用，这使得重组MFG-E8作为一种修复肠道损伤的潜在制剂进入人们的视野并引起广泛的关注。然而目前对于MFG-E8的研究主要集中在肠道炎症性损伤方面，对于其在肠道饥饿损伤方面的研究尚未有相关报道。因此我们首先借助小鼠饥饿损伤模型，检测饥饿应激后小鼠小肠黏膜MFG-E8表达的变化情况，探讨MFG-E8在小肠饥饿应激中发挥的作用。其次，作为人体含量最多的一种氨基酸，谷氨酰胺（Gln）可减轻由饥饿导致的肠道损伤，但其具体机制仍不明了。我们通过小鼠饥饿状态下谷氨酰胺灌胃模型检测谷氨酰胺对饥饿小肠黏膜MFG-E8表达的影响，尝试探索谷氨酰胺是否可以通过影响肠道

5、MFG-E8的表达而发挥肠道保护作用。最后，因小肠MFG-E8由固有层巨噬细胞表达，我们在体外细胞培养实验中，通过用不同浓度谷氨酰胺培养小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7），检测其对MFG-E8蛋白表达的影响，以对体内试验的结果进行初步的机制探讨。方法：第一部分：首先验证饥饿损伤是否可以改变肠道MFG-E8的表达。通过预实验及相关实验报道，我们得知小鼠在禁食24h后，出现明显的应激行为；48h后活动明显减少；72h后活动已很微弱；84h后小鼠开始死亡。小鼠体重下降在禁食72h后趋于平缓，因此我们选取小鼠体重下降近于最低值而又未死亡的禁食72h的小鼠作为研究对

6、象。将20只雄性C57BL/6小鼠随机分为两组。正常对照组(NC组，10只)正常饮食，自由摄水；全饥饿组(S组，10只)无饲料供给，自由摄水。饥饿72h后脱颈法处死小鼠，取小肠组织。HE染色看小肠绒毛发育情况；TUNEL法检测细胞凋亡；实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法检测小肠组织MFG-E8mRNA及MFG-E8蛋白表达。第二部分：测谷氨酰胺对饥饿小鼠小肠MFG-E8表达的影响。将25只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(NC组，n=5),全饥饿组(S组，n=5)和谷氨酰胺灌胃组(G组，共15只)。其中谷氨酰胺灌胃组根据不同的灌胃量（1g/kg/d，3g/k

7、g/d，5g/kg/d）分为3个亚组G1组（n=5）、G3组（n=5）、G5组（n=5）。NC组正常饮1上海交通大学医学院硕士学位论文食，自由饮水。S组和G组仅自由饮水。G组给予不同剂量谷氨酰胺水溶液灌胃，每天一次，每次0.5ml，共三次。NC组和S组每天给予生理盐水灌胃0.5ml。72h后脱颈法处死小鼠取小肠组织。同第一部分测小肠绒毛发育情况，细胞凋亡，小肠组织MFG-E8mRNA及MFG-E8蛋白表达。第三部分：体外测不同浓度谷氨酰胺对RAW264.7细胞的增殖及对MFG-E8表达的影响。正常啮齿类动物和人类血清谷氨酰胺的浓度约为0.6mM，正常