人羊膜间充质干细胞定位修复四氯化碳诱导小鼠肝损伤的研究

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1、２１学校代码１０１２９分类号糾５．ＵＤＣ６０２学号２０１２３１６００１博±学位论文人羊膜间充质干细胞定位修复四氣化碳诱导小鼠肝损伤的研究ＨｕｍａｎＡｍｍｏｔｉｃＭｅｓｅｎｃｈｍａｌＳ化ｍＣｅｌｌｓＡｍｅｌｉｏｒａ化ＣａｒｂｏｎｙＴｅｔｒａｃｈ－ｓｅｌｏｒｉｄｅＩｎｄｕｃｅｄＬｉｖｅｒＤａｍａｇｅｉｎＭｏｕ申请人：丛姗学科ｎ类：农学＇？、／可学利专Ｈ：基础兽医學研究方向：动物组巧化胎与发育生物学３指导教师：曹贵方教授ＩＩ论文提交日期二〇－五年六月：内蒙古农业大学研究生学位论文独创

2、声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究王作及取得的硏究成果。据我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料一，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处一，本人承担切相关责任。－．日期．＜＾论文作者签名：苗姆：如巧５内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定，即；研究生在攻读学位期间论文工作的知

3、识产权单位属内蒙古农业大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙古农业大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅。学校可公布学位论文的全部或部分内容（保密内容除外），采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名／日期：可一／（、摘要肝脏是人体内功能最多的代谢和解毒器官，具有多种生理功能参与体内消化、代谢、解毒和免疫等过程，因此，肝脏损伤可引起动物和人体的衰老病变和一其化疾病的发生，。目

4、前严重的肝脏疾病目前还没有找到种完全能治愈的措施和治疗方法。由于千细胞具有自我更新和多向分化潜能，有望为干细胞移植性治疗提供新来源，是病变组织器官损伤修复的理想首选细胞。近几年研究者们主要将目光集中在胎盘来源的羊膜组织上，不仅其获得取材方便、来源广泛、增殖能力强、免疫原性低，最重要是不受医学伦理道德限制的优点，送也是比豚胎干细胞应用更广泛的主要原因。羊膜包含两种细胞即人羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞，ａｎａｍｎｉｏｎｍｅｓｅｎｃｈｍａｌｃｅｌｌｓ其中人羊膜间充质干细胞（ｈｕｍｙ，ｈＡＭＳＣｓ起源中麻层属于成体干细胞，具备间充质干细胞特性同时还具有

5、厮胎）干细胞特性，此外ｈＡＭＳＣｓ还具有在体外特定条件下向内、中、外Ｈ个胚层分化潜能，是干细胞移植和再生医学的种子细胞。１ｈＡＭＳＣｓ，培养并、经过族蛋白酶和Ｉ型胶原酶共同消化羊膜组织获得、观察细胞生长特性：再通过免疫细胞化学、形态特征、解析分裂中期的染色体二氨基联苯胺（ＤｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅＳｔａｉｎｉｎｇ，ＤＡＢ）染色、免疫巧光染色、流式细胞术分析表面抗原二麻层分化和ＲＴ－ＰＣＲ检测等方法对培养的细、定向诱导胞进行鉴定，从人羊膜组织中分离得到纯度很高的间充质干细。试验结果表明，ｅｎｔｉｎ）ＤＡＢ染色呈现浅红色阳胞绕过免疫组化波形

6、丝蛋白（ｖｉｍ性表达；免疫焚光检测表达间充质干细胞表面标记Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和麻胎干细胞表面标记ＳＳＥＡ－４定细胞强阳性表达间质细胞表面抗原ＣＤ２９、ＣＤ４９ｄ、；流式细胞术测ＣＤ７３，不表达造血干细胞表面抗原ＣＤ３４、ＣＤ４５和人白细胞免疫抑制因子ＨＬＡ－ＤＲ经过免疫细胞化学ＲＴ－ＰＣ民检测在体外特定条件下可成功诱导分化；为脂肪细胞。结果表明ｈＡＭＳＣｓ可巧、成骨细胞、神经样细胞和膜岛样细胞体外成功分离、纯化、增殖培养并保持稳定的遗传和生物特性，还具有体外Ｈ胚层分化潜能。２、Ｗ四氯化碳，将活体染料Ｄｉｒ和簇（ＣＯＵ）诱导小鼠肝损伤为受试模型基巧

7、光素乙醜乙酸（ＣＦＳＥ）标记的ｈＡＭＳＣｓ通过尾静脉注射移植到肝损伤小鼠，观察ｈＡＭＳＣｓ在小鼠体内迁移归巢情况及移植后治巧效果。结果表明成功建立ｉｒＣＦＳＥ标记ｈＡＭＳＣｓ分别通过活体成像和冰冻切片免疫小鼠肝损伤模型，Ｄ和巧光观察移植ｈＡＭＳＣｓ可［＾＾迁移归巢到受损的肝脏，ｈＡＭＳＣｓ移植后对受损小，鼠肝功、组织病理学义分泌白蛋白等方面都有修复作用，肝损伤程度明显改善治疗效果显著。３、实时巧光定量和蛋白印迹技术检测表明ｈＡＭＳＣｓ移植后可提高受损肝组