mir-21-5p对颅脑创伤后神经-血管单元修复的影响及作用机制研究

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1、分类号：R-651.1学校代码：10062密级：学号：2013601134博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：miR-21-5p对颅脑创伤后神经-血管单元修复的影响及作用机制研究TITLE：ThebasicresearchonthefunctionandmechanismofmiR-21-5pintherestorationofneuro-vascularunitaftertraumaticbraininjury一级学科：临床医学二级学科：外科学神经外科论文作者：葛歆瞳指导教师：张建宁教授天津医科大学研究生院二

2、〇一五年五月分类号：R-651.1学校代码：10062密级：学号：2013601134学位类别：科学学位专业学位√学科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：miR-21-5p对颅脑创伤后神经-血管单元修复的影响及作用机制研究TITLE：ThebasicresearchonthefunctionandmechanismofmiR-21-5pintherestorationofneuro-vascularunitaftertraumaticbraininjury一级学科：临床医学二级学科：外科学神经外科论

3、文作者：葛歆瞳指导教师：张建宁教授导师组成员：康春生教授雷平副教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关

4、数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学博士学位论文中文摘要研究目的：创伤性颅脑损伤（TBI）致残、致死率高，其所致的继发性脑损伤与TBI预后密切相关。神经-血管单元（NVU）是由神经元、神经胶质细胞、血管内皮细胞及细胞外基质等构成的功能单元，通过其中各种成分的相互作用维持脑组织内环境稳态。促进TBI后NVU

5、损伤修复是治疗继发性脑损伤、救治TBI的关键。miRNAs在TBI领域中的研究报道尚少。我所在课题组的前期研究发现，TBI大鼠创伤侧大脑皮层miR-21-5p表达量较伤前明显升高。此外，初步证实miR-21-5p表达水平的升高可以减轻脑组织细胞凋亡，并改善TBI大鼠的神经功能预后。本实验将通过动物实验，进一步阐明miR-21-5p在NVU损伤修复中的作用及机制，为探索TBI后miRNAs治疗的新策略提供理论依据。方法：1.应用qRT-PCR及miRNA原位杂交+免疫荧光双染技术，检测TBI后miR-21-5p在创伤灶脑组织的表达变化，及

6、其在神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞及脑微血管内皮细胞中的原位表达变化。2.通过改进的神经功能评分及水迷宫实验，评价TBI大鼠神经功能；应用TUNEL法细胞凋亡检测，评价miR-21-5p对脑组织细胞凋亡的影响；应用免疫荧光法检测脑微血管密度，评价miR-21-5p对脑组织血管生成修复的影响；通过脑组织干湿重检测、血脑屏障（BBB）EvansBlue渗漏量检测及紧密连接蛋白（Occludin及Claudin-5）定量检测，评价miR-21-5p对BBB通透性的影响。3.应用WesternBlot和qRT-PCR技术，检测miR-21-5

7、p可能的作用靶点PTEN、AKT信号通路及其下游蛋白（凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3；血管生成及稳定性相关因子Ang-1、Tie-2）的表达变化，探讨miR-21-5p影响细胞凋亡、血管生成修复及BBB通透性的相关机制。结果：1.（1）TBI后，创伤灶脑组织miR-21-5p表达量自伤后6h起逐渐升高，于伤后3d达峰，随后逐渐下降，于伤后14d降低至假手术组大鼠水平；且miR-21-5pI天津医科大学博士学位论文在神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞、脑微血管内皮细胞（BMVECs）中的原位表达水平均有不同程度的升高。（

8、2）在TBI前后，miR-21-5p在脑神经组织中均主要表达于神经元及星形胶质细胞。（3）通过侧脑室注射脂质体携带的miR-21-5pagomir/antagomir，可以上调/下调创伤灶脑组织于伤后6h、