FGF21对创伤性脑损伤后血脑屏障的修复作用及其机制研究

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1、分类号：R9单位代码：10343学号：151005783硕士学位论文论文题目:FGF21对创伤性脑损伤后血脑屏障的修复作用及其机制研究研究生姓名：陈珺学科专业：药学类型：学术型指导教师：林丽教授二O一八年五月温州医科大学硕士学位论文论文题目:FGF21对创伤性脑损伤后血脑屏障的修复作用及其机制研究答辩委员会主席：朱虹教授浙江大学答辩委员会成员：蔡琳教授温州医科大学刘志国副教授温州医科大学刘彦隆副研究员温州医科大学论文答辩日期：2018.5.201温州医科大学硕士学位论文目录缩词简表…………………………………………………………………3中文摘要…………………………………………………………………4英

2、文摘要…………………………………………………………………6引言……………………………………………………………………9第一部分rhFGF21对小鼠创伤性脑损伤模型中血脑屏障的修复作用及其机制研究材料与方法……………………………………………………………12结果……………………………………………………………………22分析与讨论……………………………………………………………29第二部分rhFGF21在TNFα模型中对人脑微血管内皮细胞血脑屏障的修复作用及其机制研究材料与方法……………………………………………………………31结果……………………………………………………………………36分析与讨论……………

3、………………………………………………43总结……………………………………………………………………44参考文献………………………………………………………………45附录……………………………………………………………………49致谢……………………………………………………………………50综述……………………………………………………………………51参考文献………………………………………………………………55论文独创性声明………………………………………………………582温州医科大学硕士学位论文缩词简表英文缩写英文全称中文全称TBITraumaticbraininjury创伤性脑损伤BBBBloodbrai

4、nbarrier血脑屏障HBMECHumanbrainmicroveselendotheliacell人脑微血管内皮细胞EBEvansBlue伊文思蓝FITCFluoresceinisothiocyanate异硫氰酸荧光素TJTightjunction紧密连接AJAdhesionjunction黏附连接ZO-1Zonulaoccludens-1紧密连接蛋白FGF21Fibroblastgrowthfactor21成纤维细胞生长因子21FGFR1Fibroblastgrowthfactorreceptor1成纤维生长因子受体-1过氧化物酶体增殖物激活PPARγPeroxisomeprolifer

5、ator-activatedreceptorγ受体γPBSPhosphate-bufferedsaline磷酸盐缓冲盐水TBSTrisbufferedsaline三乙醇胺缓冲盐水溶液DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜3温州医科大学硕士学位论文FGF21对创伤性脑损伤后血脑屏障的修复作用及其机制研究中文摘要背景及目的：创伤性脑损伤（TBI）是临床常见的损伤，在外伤中的发生率仅次于四肢损伤，又因病情复杂，治疗方法限制、预后复原差等特点，存在着极高的死亡率及致残率。脑损伤后随即带来的血脑屏障破坏，导致了脑水肿、炎症细胞侵入、氧化损伤等二次损伤的发生。成纤维生长因子21（FGF21）

6、在脑内有潜在的神经保护作用。然而其对脑外伤后血脑屏障是否具有修复作用，以及具体作用机制并不十分清楚。本文旨在阐明外源性给予FGF21对创伤性脑损伤后血脑屏障的修复作用及其机制的研究。方法：1、动物创伤性脑损伤的建立剃去已麻醉的小鼠背部及头部的毛，并将其固定在脑立体定位仪上。固定标准为保持顶固左右位水平、前后位切线水平。涂抹碘酒消毒后，按正中矢状走向切开头部皮肤，暴露颅骨上的前囟、人字点及左脑部分。于前囟后0.6mm，中线旁开1mm，用牙科钻进行颅骨钻孔，磨出以直径4mm的正圆形骨窗，调整打击器的打击管与脑接触部分垂直，以此来确保垂直打击。吸去出血后，缝合切口。一天后对小鼠进行Garcia行为学

7、评分，伊文思蓝渗透实验，脑含水量测定。随后取脑组织用于石蜡切块组织染色、Westernblot等相应蛋白指标的检测。本实验主要检测紧密连接蛋白（ZO-1、Occludin、Claudin-5）、粘附蛋白（VE-Cadherin）、p-FGFR1、FGFR1、β-klotho、PPARγ等相关蛋白表达情况。2.人脑微血管内皮细胞TNFα模型的建立将人脑微血管内皮细胞（HBMEC）用EBM-2完全培养