核盘菌转录因子ss-foxe2的基因功能研究

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1、核盘菌转录因子Ss-FoxE2的基因功能研究ThefunctionalanalysisofthetranscriptionfactorSs-FoxE2inSclerotiniasclerotiorum（Lib.）deBary作者姓名：王璐专业名称：植物病理学指导教师：潘洪玉教授学位类别：农学硕士答辩日期：2015年6月1日中文摘要核盘菌转录因子Ss-FoxE2的基因功能研究核盘菌（Sclerotiniasclerotiorum（Lib.）deBary）是一种腐生性丝状病原真菌，它可以造成多种农作物的严重病害，从而引起重大经济损失。核盘菌的子囊盘是由菌核在合适的条件下萌发而成的圆盘状

2、子实体，发育成熟的子囊盘将会释放子囊孢子，子囊孢子飞散到周围环境中侵染寄主植物，造成菌核病害的流行。在核盘菌基因组中存在4个Forkhead类转录因子的同源基因，分别为Ss-FoxE1、Ss-FoxE2、Ss-FoxE3和Ss-FoxE4，我们推断它们与核盘菌的有性生殖密切相关。因此，在本文中我们以Ss-FoxE2为研究对象，并对在核盘菌有性生殖中的作用进行了研究。本研究首先根据核盘菌基因组序列，克隆得到Ss-FoxE2上游890bp序列以及下游1024bp序列，将上下游序列分别连接到敲除载体pXEH上，成功构建了Ss-FoxE2的敲除载体，然后利用裂解酶消化核盘菌菌丝细胞壁，从而

3、制备了质量较好的原生质体细胞，并用PEG-CaCl2介导的原生质体转化法将已构建好的敲除载体转化到核盘菌的原生质体中，以潮霉素为筛选抗性进行转化子的筛选培养，然后使用快速PCR检测方法进行初步验证，将验证正确的转化子使用Southern杂交的方法进行进一步验证。另一方面，克隆Ss-FoxE2编码基因及其上下游在内的3.4kb的片段序列，将克隆得到的序列连接到互补载体上，将构建好的互补载体转化至敲除突变体的原生质体细胞中，通过G418抗性筛选以及PCR验证得到互补成功的转化子。将Ss-FoxE2敲除突变体和Ss-FoxE2互补突变体对照野生型菌株，进行生物学特性分析和致病性分析，结果

4、发现，Ss-FoxE2敲除突变体与野生型菌株相比，在菌丝生长速率、菌核数量、菌核干重以及致病性上几乎没有任何差别，但是，Ss-FoxE2敲除突变体不能诱导发育形成子囊盘，这说明核盘菌转录因子Ss-FoxE2参与调控核盘菌子囊盘的形成，影响核盘菌的有性生殖，这将为菌核病的防治提供新的理论基础与技术支撑。关键词：核盘菌，转录因子，Ss-FoxE2，基因敲除，子囊盘。IAbstractThefunctionalanalysisofthetranscriptionfactorSs-FoxE2inSclerotiniasclerotiorum（Lib.）deBarySclerotiniasc

5、lerotiorum（Lib.）deBaryisonekindoffilamentousfungiwhichcancauseavarietyofplantdiseasesandhugelossestoagriculturalproduction.ApotheciaistheveryimportantpartofS.sclerotiorumandformedfromsclerotia,undersuitableenvironmentalconditions,itcanreleaselargequantitiesofascosporesthatinitiatenewdiseasecyc

6、les.InS.sclerotiorum,therewere4Forkhead-boxtranscriptionfactorhomologousgenes,Ss-FoxE1,Ss-FoxE2,Ss-FoxE3andSs-FoxE4respectively,andweinferthattheycloselyrelatedtosexualreproductionofS.sclerotiorum.So,inthisresearch,westudiedtheroleofSs-FoxE2inS.sclerotiorum.AccordingtoS.sclerotiorumgenomeseque

7、nce,890bpupstreamfragmentand1024bpdownstreamfragmentofSs-FoxE2wereclonedandligatedintopXEHrespectivelytoconstructtheknock-outvectorforSs-FoxE2.Inonehand,protoplastsofS.sclerotiorumhavebeenpreparedbyLysingdecompositionofhyphae.Theknock-o