基于甲基化修饰探讨加减养心通脉方对冠心病血瘀证及亚型ctnnb1、des基因表达的影响研究

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1、分类号：学校代码：级：学号：湖南中医药大学硕士学位论文基于甲基化修饰探讨加减养心通脉方对冠心病血瘀证及亚型、基因表达的影响研宄科业中医方剂学方剂的作用机理与配伍规律研究方向：临床运用研究作者姓名：向忠军瞿延晖教授导师姓名、职称：李杰教授学位类型：科学学位中国湖南长沙二零一五年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研宄成果。除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包括其他已经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得湖南中医药大学或其他单位的学位或证实而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中做了明确的说明。作

2、者签名：年月日关于学位论文使用授权说明本人了解湖南中医药大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被査阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部和部分内容，可以釆用复印、缩印或其它手段保存学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门的规定送交学位论文。作者签名：义匆导师签名：年月日中文摘要目的：通过甲基化芯片检测非血缘性冠心病血瘀证甲基化差异基因，从中筛选出和基因，“以方测证”通过加减养心通脉系列方对非血缘性冠心病（气虚、痰浊、气滞）血瘀证亚型进行中药干预，探讨冠心病血瘀证易感基因甲基化修饰和表达的作用机制，为中医药临床防治冠心病及血瘀证提供思路和理论依

3、据。方法：采用芯片检测基因甲基化方法（对收集的非血缘性冠心病血瘀证组例，冠心病非血瘀证组例与健康对照组例检测），检测冠心病血瘀证甲基化差异基因，从中选出非血缘性冠心病血瘀证、两个甲基化改变的易感基因，并比较三组相关临床资料；采用技术对非血缘性冠心病血瘀证亚型进行加减养心通脉方干预，检测干预前后候选基因表达程度。课题中药干预前共收入病例为实验组（冠心病气滞血瘀证组、冠心病痰浊血瘀证组各例、冠心病气虚血瘀证组例），中药干预后共收集例血样（气滞血瘀证例、痰浊血瘀证例、气虚血瘀证例），对所选两个易感基因的表达程度及血脂、血糖指标进行干预前后对比，探讨养心通脉方对非血缘性冠心病（气虚

4、、痰浊、气滞）血瘀证亚型、两个基因表达、甲基化修饰及血脂影响，并比较三组治疗前后相关临床资料。结果：选取肌间线蛋白（、连环蛋白两个易感甲基化基因；血糖、血脂指标在非血缘性非血瘀证组，血瘀组，与正常对照组间的差异无统计学意义（各组间的两两比较亦无统计学意义戶但是血糖值在冠心病血瘀证及非血瘀证组都明显高于正常组；血脂、、值在冠心病血瘀证及非血瘀证组明显高于正常组；值在正常组略高于冠心病血瘀证及非血瘀证组。不同冠心病证型在中药治疗后，相比治疗前基因表达均明显所下降，且有统计学意义，其中痰浊血瘀证组（，气滞血瘀证组，气虚血瘀证组（；但是不同证型的患者在治疗后，相比治疗前基因表达改变

5、不明显，且无有统计学意义，其中痰浊血瘀证组、气滞血瘀证组、气虚血瘀证组（；不同证型的患者在治疗后，相比治疗前血糖、、、、值均有所下降，各组之间比较没有统计学意义；通过自身配对符号秩和检验，气虚血瘀组前后血糖值改变有统计学意义（三组治疗前后值改变有统计学意义（，气滞血瘀证组前后值改变有统计学意义（，其他没有统计学意义（。结论：非血缘性冠心病血瘀证存在明显的血脂紊乱情况；基因和基因的甲基化修饰可能是冠心病血瘀证的易感危险因素；加减养心通脉方可以明显改善冠心病血瘀证亚型脂类及血糖异常，有很好的降糖、脂类作用；加减养心通脉方能对冠心病（气滞、痰浊、气虚）血瘀证三个亚型基因表达有明显

6、的调控作用，但对基因表达无明显的调控作用；进一步证实了基因的甲基化修饰是冠心病血瘀证的发病机制之一。关键词：冠心病血瘀证；基因；基因；甲基化修饰，加减养心通脉方本项目受：中国博士后基金特别资助项目“甲基化的表观遗传调控网络在冠心病血瘀证家系中的作用和中药干预”（项目编号：；湖南省科技厅计划项目“基于甲基化的表观遗传调控网络在冠心病血瘀证家系中的作用和机制研宄”项目编号：的资助。StudyontheexpressionofDESgeneandCTNNB1geneinthebloodstasissyndromeandsubtypeofcoronaryheartdiseaseby

7、modifiedYangxintongmaiformulaandmethylationmodificationXIANG-ZHONG-JUNAbstractObjective:ThroughDNAmethylationchipdetection,nonbloodofcoronaryheartdiseaseandbloodstasisdifferentiallymethylatedDNAgeneandfromselectedCTNNB1anddesgene，，，，，，，group，，，，，，，，，beforetrea