基于流式细胞术诊断结核感染的方法建立与优化

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2、学位级别：硕壬学科专业名称！遗传学、＾兰：２０１５年５月论文答辩日期论文提交日期—：２０１５年５月＾、＾学位授予单位：扬州大学学位授予２０１５６－■日期．；年月３０；把占）｝＾‘’’：委员娜＊皆￣严．；皆為、．：式心據义、蔭．；難々々舶带月，兴！解．每ｔ善炎翁：讓啼盏＾戸禅載遠，賴知連托尘－－吴凡＝基于流式细胞术诊断结核感染的方法建立与优化Ｊ＿基于流式细胞术诊断结核感染的方法建立与优化研究生：吴凡导师；焦新安教授张晓明研究员中文摘要一我国是全球结核病流行严重的国家之，在结核病的预防控制中，我国面临的最大难

3、题之一就是如何快速准确地对早期结核感染者做出诊断。目前，培养出结核分枝杆菌是诊断结核的金标准，但培养时间长，不利于早期诊断和治疗。传统的免疫学诊断方法结核菌素皮肤试验（１ＳＴ）则存在着敏感性低、特异性差的缺点，检出结果可信度不窩。所Ｗ本、研究计划通过检测结核病组未感染结核组的结核分枝巧菌抗原特异性Ｔ细胞比例，建立－基于流式胞内细胞因子检测的结核感染诊断方法，同时将流式检测结果与ＴＳＰＯＴ结果进一行对比分析，进步确认流式胞内细胞因子检测结核特异性Ｔ细胞在结核感染诊断方面的－ＰＤ－－１６／ＣＦＰ０应用价值；此外，将针对和ＳＬＡＭ的单克隆抗体与结核特

4、异性抗原ＥＳＡＴ１共刺激，Ｗ期望提髙结核杆菌抗原Ｔ细胞的功能，使得流式检测法能够更加灵敏、准确；在确立该方法的建立后，通过流式胞内细胞因子检测，对重组的结核分枝杆茵－ＥＳＡＴ－６／ＣＦＰ１０变态反应原用于结核病临床辅助诊断试验前后病人细胞因子的分泌情况做一。个总体评价，从而为结核的临床硏究提供帮助１．流式细胞术诊断结核感染的价值硏究？２、连续收集２０１４年７月０巧年３月上海市公共卫生临床中屯成人确诊结核病人７１例，未感染结核对照２０例。结合流式细胞术、胞内细胞因子染色，对结核特异性抗原－悦ＡＴ６／ＣＦＰ－１０Ｔ立流式胞刺激后的特异性效应细胞进行检测

5、，建内细胞因子检测诊断结－ＳＰＯＴ检测核感染的方法，所有的受试者同时接受Ｔ。研究结果显示基于流式检测ＥＳＡＴ－６／ＣＦＰ－１０特异性ＣＤ４叮细胞能很好地区分结核病人与未感染结核者，并且在诊断方面敏感性－（８３％）要商于ＴＳＰＯＴ检测（７４．６％），由于结核特异性抗原的使化排除了环００境因素及ＢＣＧ的影响，特异性得到很好的保障，研究也显示特异性达到１％。随后的ＲＯＣ曲线评价中，ＡＵＣ的值为化８６８，表明流式检测法对于结核感染有着很好的诊断价值。结合上述结果，该方法可作为结核病诊断的有效手段。扬州大学硕±学位论文２．流式细胞术诊断结核感染的化化

6、共刺激与共抑制分子的协同合作在Ｔ细胞免疫应答中有着重耍的作用，医学上通过共刺激分子或抑制受体活性能达到提高巧效的目的。本研究希望在肯定流式细胞术在检测结核感染实用价值的基础上，加入针对ＰＥＭ、ＳＬＡＭ的抗体协同结核特异性抗原共刺激，用流式细胞仪检测各组特异性Ｔ淋己细胞的比例，并与加抗体前进行比较，Ｗ期探讨通过该方法上调各细胞因子的分泌水平来提高流式诊断灵敏度的可行性。结果显示，在受试的％－名结核病人中，有８名无论是在ＣＤ２８和ＣＤ４９ｄ共刺激组，还是ａＰＤ１和泌ＬＡＭ共刺激组，结核特异性Ｔ细胞的比例都表现出明显的增高趋势，并且没有对阴性对照组的背景

7、值造成干扰－，对于其他的结核病人检测下来并没有明显的趋势。对此结果，初步认为抑制ＰＤ１信号途径化及一ＳＬＡＭ共刺激对提高结核病人的Ｔ细胞功能有定的帮助，但要揭示结核特－－ＥＳＡＴ６ＣＦＰ－异性抗原／１０联合浊Ｄ１和ａＳＬＡＭ共刺激能提高流式胞內细胞因子检测技术的灵敏度还需要加大样本量。３－－．重组结核分枝杆菌ＥＳＡＴ６／ＣＦＰ１０变态反应原临床试验前后的评价－６／ＣＦＰ－本研究运用流式胞内细胞因子检测技术对临床上接受路ＡＴ１０变态反应原辅助一Ｔ细诊断试验的病人，做个皮试前后特