附子水溶性化学成分及其心脏毒性研究

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1、成都中医药大学2018届硕士研究生学位论文（药学院）二○一八届硕士研究生学位论文附子水溶性化学成分及其心脏毒性研究StudyontheEffectofStudyonthehydrosolubleconstituentsofFuziandthecardiotoxicityonzebrafish研究生姓名：方成鑫指导教师：郭力教授学科专业：药物化学二○一八年五月I成都中医药大学2018届硕士研究生学位论文学位论文附子水溶性化学成分及其心脏毒性研究方成鑫指导教师姓名：郭力教授申请学位级别：硕士学位专业名称：药物化

2、学论文提交时间：2018年5月论文答辩时间：2018年5月二○一八年五月II成都中医药大学2018届硕士研究生学位论文摘要利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、MCI柱色谱、C18反相柱色谱、制备薄层色谱、C18反相半制备型高效液相色谱法、重结晶法等多种色谱分离手段，从附子(AconitiLateralisRadixPraeparata)水提液正丁醇部位，分离纯化得到16个化合物，通过NMR、MS等手段进行结构鉴定了13个化合物，鉴定结果分别为Songorine(宋果灵，1)、Hetisine(2)、Neoline(

3、尼奥灵，3)、Karacoline(多根乌头碱，4)、BeiwucineIII(5)、N-(2'-β-D-glucopyranosyl-5'-hydroxysalicyl)-4-hydroxyanthranilicacidmethylester[N-(2'-β-D-吡喃葡萄糖基-5'-羟基水杨基)-4-羟基邻氨基苯甲酸甲酯，6]、Adenosine(腺嘌呤核苷，7)、Adenine(腺嘌呤，8)、Carnine(次黄嘌呤核苷，9)、Hypoxanthine(次黄嘌呤，10)、Pennogenin(偏诺皂苷元

4、，11)、2,3-Furandiol(2,3-呋喃二醇，12)、Benzoicacid(苯甲酸，13)，14、15、16初步鉴定为2个木脂素苷和1个芳香族苷类成分，目前正在使用2D-NMR谱进行结构确证，可能为3个新化合物。其中化合物11为首次从附子中分离得到的化合物类型，化合物12为首次从附子中分离得到的化合物。采用酸性染料比色法和高效液相色谱法，分别对附子七种炮制品及其水煎液中生物碱类成分进行分析。从化学成分的角度上，阐释了附子炮制减毒和久煎减毒特性，分析不同炮制工艺对附子中生物碱类成分的影响。结果表明

5、，通过炮制和久煎，不同炮制品均可显著降低附子中双酯型生物碱的含量，破坏率达95%以上。经过胆巴制和漂洗可能会使附子中生物碱类成分大量流失，而未经胆巴制和漂洗的品种则保留了更多生物碱类成分。选用心脏特异表达绿色荧光斑马鱼作为实验动物，进一步对附子不同炮制品的水煎液、水煎液中总生物碱及单一生物碱类成分的毒性进行研究。结果表明，在给药剂量(附子生药量80mg/mL)下，水煎液会造成斑马鱼心律失常和死亡，对斑马鱼躯体和心脏形态无显著影响，与其中生物碱含量无相关性；水煎液中总生物碱对斑马鱼的毒性相对较低，主要造成降心

6、率作用，但会造成斑马鱼轻微躯体弯曲、心包囊肿和充血。单一生物碱中，对斑马鱼胚胎毒性：双酯型>单酯型≈胺醇型，双酯型生物碱毒性：新乌头碱>乌头碱>次乌头碱，主要表现为严重的心律失常，最高剂量组在给药后24h，斑马鱼出现濒死状态。此外，还会造成躯体弯曲、心包囊肿、充血、房室不齐和心室停搏。单酯型生物碱和胺醇型生物碱III成都中医药大学2018届硕士研究生学位论文毒性较低，主要为降心率作用，对斑马鱼躯体和心脏形态均无明显毒性。创新点：(1)从附子水煎液正丁醇部位分离纯化得到16个单体化合物，鉴定出13，另外3个化

7、合物初步鉴定为2个木脂素苷和1个芳香族苷，推测为新化合物。化合物11为首次从附子中分离得到的化合物类型，化合物12为首次从附子中分离得到的化合物。(2)从化学的角度，阐明炮制和久煎的减毒特性，提出影响附子不同炮制品生物碱类成分含量的关键工艺为胆巴制和漂洗工艺。(3)首次采用斑马鱼作为实验动物对附子不同炮制品水煎液及其中总生物碱心脏毒性进行研究。(4)首次采用斑马鱼作为实验动物对不同给药时间和剂量的乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头碱、苯甲酰新乌头碱、苯甲酰次乌头碱、宋果灵、多根乌头碱心脏毒性进行研究。关

8、键词：附子；水溶性；化学成分；心脏毒性；二萜类生物碱；斑马鱼IV成都中医药大学2018届硕士研究生学位论文V成都中医药大学2018届硕士研究生学位论文AbstractBymeansofrecrystallization,silicagelcolumnchromatography,SephadexLH-20,MCIcolumnchromatography,C18reversedphasecolumnchromato