针刺俞募穴对GFRα1基因敲除后FC小鼠GDNF-PI3K-Akt信号转导通路影响的研究.pdf

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1、成都中医药大学硕士学位论文成都中医药大学（针灸推拿学院）二0一八届硕士研究生学位论文针刺俞募穴对GFRα1基因敲除后FC小鼠GDNF-PI3K-Akt信号转导通路影响的研究StudyonEffectsofElectroacupunctureatBack-shuandFront-muPointsonGDNF-PI3K-AktSignalTransductionPathwayinGFRα1-KnockoutandFunctionalConstipationMice研究生姓名：孙路强指导教师：李瑛教授学科专业：针灸推拿学二

2、○一八年五月成都中医药大学硕士学位论文学位论文针刺俞募穴对GFRα1基因敲除后FC小鼠GDNF-PI3K-Akt信号转导通路影响的研究孙路强指导教师姓名：李瑛教授申请学位级别：硕士专业名称：针灸推拿学论文提交时间：2018年5月论文答辩时间：2018年5月二○一八年五月成都中医药大学硕士学位论文中文摘要目的：本研究在针灸治疗功能性便秘疗效确切的基础上，以前期结果为指导，拟探讨针刺大肠俞募穴治疗功能性便秘的作用机制，是否受GDNF-PI3K-Akt信号转导通路的影响，旨在为针刺俞募穴治疗功能性便秘提供科学依据，以利于临

3、床推广应用。方法：10只野生型小鼠设为对照组，13只GFRα1基因敲除小鼠按照随机数字表法随机分为2个组：其中模型组7只，针刺组6只。GFRα1基因敲除小鼠采用复方地芬诺酯灌胃法复制模型，总共造模14天。电针交替针刺同侧天枢穴和大肠俞穴，每次治疗30分钟，1天1次，共连续治疗5天。治疗结束后，取胃、小肠，检测胃排空率和小肠推进率；取远端结肠，利用免疫组化、原位杂交、PCR及WesternBlot等方法检测GDNF-PI3K-Akt信号通路的表达水平。结果：1、胃肠传输功能检测：（1）胃排空率与对照组相比，模型组和针刺

4、组小鼠胃排空率降低，差异有统计学意义（P＜0.01，P＜0.01）；针刺组与模型组相比，胃排空率变化不明显，差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）小肠推进率与对照组相比，模型组小肠推进率降低（P＜0.05），针刺组小鼠小肠推进率也降低（P＜0.01），差异有统计学意义；针刺组与模型组相比，小肠推进率变化不明显，差异无统计学意义（P＞0.05）。2、GDNF-PI3K-Akt信号转导通路检测（1）GDNF蛋白及其mRNA的表达1成都中医药大学硕士学位论文与对照组比较，模型组结肠内GDNF蛋白及其mRNA的表达具有下降

5、趋势，但无统计学意义（P>0.05，P>0.05）；与模型组比较，针刺组GDNF蛋白及其mRNA的含量没有显著差异（P>0.05，P>0.05）。（2）Rai蛋白及其mRNA的表达与对照组比较，模型组结肠内Rai蛋白及其mRNA的表达下调（P＜0.01，P＜0.01）；与模型组比较，针刺组Rai蛋白及其mRNA的表达无统计学意义（P＞0.05，P＞0.05）。（3）RET蛋白及其mRNA的表达与对照组比较，模型组结肠内RET蛋白表达下调（P＜0.01），RETmRNA的含量有下降趋势，但无统计学意义（P>0.05）；

6、与模型组比较，针刺组RET蛋白及其mRNA的含量无显著差异（P>0.05，P>0.05）。（4）PI3K、Akt表达水平与对照组比较，模型组结肠内PI3K蛋白和Akt蛋白的含量升高（P＜0.01，P＜0.01）；与模型组比较，针刺组PI3K蛋白和Akt蛋白的表达水平下调（P＜0.05，P＜0.05）。结论：1、GFRα1基因敲除后，针刺大肠俞募穴对功能性便秘小鼠胃肠动力的改善作用不明显。2、GFRα1基因敲除后，针刺大肠俞募穴对功能性便秘小鼠GDNF-PI3K-Akt信号通路各分子表达水平的调控作用不明显。从反面证实

7、了GDNF-PI3K-Akt信号转导通路可能是针刺大肠俞募穴治疗功能性便秘的重要路径。3、GDNF并非是介导PI3K-Akt信号通路的唯一作用分子，针刺大肠俞募穴对PI3K-Akt信号通路表达的影响可能包含其他路径。关键词：针刺；俞募穴；功能性便秘；GFRα1基因；GDNF-PI3K-Akt信号通路2成都中医药大学硕士学位论文ABSTRACTObjective：Toexplorethemechanismofelectroacupuncture（EA）atBack-shuandFront-mupointsonGDNF-

8、PI3K-Aktsignalpathwayinfunctionalconstipation（FC），basedontheefficacyofacupunctureinthetreatmentoffunctionalconstipationandtheguidanceofpreviousresults，soastoprovidescientifi