针刺俞募穴对功能性便秘小鼠胃肠传输功能及ICC、SMC影响的研究

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1、学位论文针刺俞募穴对功能性便秘小鼠胃肠传输功能及ICC、SMC影响的研究罗芳丽指导教师姓名：李瑛申请学位级别：硕士专业名称：针灸推拿学论文提交时间：2017年5月论文答辩时间：2017年5月二○一七年五月万方数据成都中医药大学2017届硕士学位论文中文摘要目的：本研究探讨针刺俞募穴治疗功能性便秘小鼠，对其胃肠传输功能、结肠组织形态学及结肠ICC、SMC的影响，旨在探索针刺大肠俞募穴治疗该病的效应机制，为针刺治疗本病的临床选穴及应用提供科学依据。方法：1、实验一：选用昆明小鼠80只，随机分为5组：空白对照组、模型组、空白针

2、刺组、针刺组、药物组，每组各16只。采用复方地芬诺酯灌胃法复制功能性便秘模型，选取双侧天枢、大肠俞交替针刺，每次电针30min，每天1次，5次为一个疗程，疗程之间休息2天，共治疗2个疗程。分别于第1、2疗程结束后，禁食不禁水12h，活性炭以0.1ml/10g的剂量进行灌胃，30min后处死小鼠，剪取肠管，测小肠推进率，同时取小鼠远端结肠，检测结肠平滑肌张力变化幅度。2、实验二：选用昆明小鼠80只，随机分为5组：空白对照组、模型组、空白针刺组、针刺组、药物组，每组各16只。模型制作及电针操作均同实验一。各组分别于实验结束后

3、取远端结肠，一部分用于MOTICBA600Mot全自动数字高倍扫描显微镜观察结肠组织形态，另一部分用c-kit、α-SMA对ICC、SMC细胞进行免疫荧光双重标记，TCS-SP2激光共聚焦显微镜观测结果并采集图像，用Image-ProPlus6.0图像分析软件进行图像三维重建和荧光值定量分析，计算细胞荧光值。结果：1、胃肠传输功能检测（1）小肠推进率与空白对照组比较，模型组小鼠小肠推进率明显降低，差异具有统计学意义（P<0.01），提示功能性便秘小鼠小肠推进速度减慢。与模型组比较，针刺组和药物组小肠推进率显著提高，差异具

4、有统计学意义（P<0.05，P<0.01），提示针刺和药物可以明显加快功能性便秘小鼠的小肠推进速度。空白对照组与空白针刺1万方数据成都中医药大学2017届硕士学位论文组的小鼠小肠推进率进行比较，两者差异不明显（P＞0.05），提示针刺对健康小鼠小肠推进率的改善作用不明显。第1、2疗程间比较，各组内小肠推进率变化不明显（P＞0.05）。（2）结肠平滑肌平均张力变化百分数与空白对照组比较，模型组小鼠结肠平滑肌张力变化幅度呈降低趋势，差异无统计学意义（P＞0.05）；与模型组比较，针刺可增强便秘小鼠的结肠平滑肌张力变化幅度（P

5、＜0.05）；空白对照组与空白针刺组比较，两者结肠平滑肌张力变化幅度百分数的差异无统计学意义（P＞0.05）。第1、2疗程间比较，各组内结肠平滑肌张力变化不明显（P＞0.05）。2、结肠组织形态学及ICC、SMC细胞激光共聚焦观察（1）组结肠组织形态学观察空白对照组：结肠平滑肌层厚度正常，平滑肌细胞排列整齐，形态正常，结肠黏膜完整，黏膜腺体丰富且排列整齐，无水肿及充血，肌层内肌间神经丛数量较多，神经细胞排列整齐；模型组：结肠平滑肌层厚度变薄，平滑肌细胞排列紊乱，细胞有空泡样变性，结肠黏膜完整性稍差，腺体萎缩，腺泡减少，分

6、布稀疏，排列不规则，无水肿及充血，肌间神经丛数量减少，神经细胞排列紊乱，内见空泡样改变；空白针刺组、针刺组及药物组结肠形态学与空白对照组比较无显著差异。第1、2疗程间比较，各组内结肠组织形态学变化不明显。（2）ICC及SMC细胞激光共聚焦观察与空白对照组相比，模型组c-kit、α-SMA表达荧光强度明显减弱（P＜0.01，P＜0.01），空白针刺组c-kit表达荧光强度明显减弱（P＜0.01），空白针刺组α-SMA表达荧光强度减弱（P＜0.05）；与模型组相比，针刺组及药物组c-kit表达荧光强度增强（P＜0.05，P＜

7、0.05），针刺组α-SMA表达荧光强度增强（P＜0.05），药物组α-SMA表达荧光强度呈上升趋势，差异无统计学意义（P＞0.05）。第1、2疗程间比较，各组内结肠c-kit、α-SMA表达荧光强度变化不明显（P＞0.05，P＞0.05）。结论：1.针刺大肠俞募穴对健康小鼠胃肠传输功能、结肠组织形态学及结肠ICC、SMC细胞的改善作用不明显。2万方数据成都中医药大学2017届硕士学位论文2.针刺大肠俞募穴可以改善功能性便秘小鼠胃肠传输功能、结肠组织形态、增加小鼠结肠ICC和SMC的免疫荧光值，促进ICC和SMC的恢复，

8、进而改善胃肠动力，治疗功能性便秘。3.针刺大肠俞募穴治疗功能性便秘的疗效与针刺疗程不一定成正比，针刺治疗只需达到有效的刺激量即可。关键词：针刺俞募穴功能性便秘胃肠传输功能ICCSMC3万方数据成都中医药大学2017届硕士学位论文ABSTRACTObjective:Todiscussestheeffectofelect