脊髓BDNF-TrkB参与母婴分离所致的慢性内脏高敏感

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1、分类号：R34学校代码：10392学科专业代码：071006学号：2130101579硕士研究生学位论文脊髓BDNF-TrkB参与母婴分离所致的慢性内脏高敏感EffectsofBDNF-TrkBonChronicVisceralHypersensitivityCausedbyNeonatalMaternalSeparation学位类型：理学硕士所在学院：基础医学院申请人姓名：戴亨纷学科、专业：神经生物学导师：林春教授研究起止日期：2014年06月至2016年03月答辩委员会主席：俞昌喜教授答辩日期：2016年05月21日二○一六年五月01目录中英文缩略词表………

2、………………………………………………………………………………………………………………4中文摘要………………………………………………………………………………………………………………………………………5英文摘要………………………………………………………………………………………………………………………………………7前言…………………………………………………………………………………………………………………………………………9材料与方法………………………………………………………………………………………………………………………………112.1材料……………………………………

3、……………………………………………………………………………………112.1.1实验动物…………………………………………………………………………………………………………112.1.2主要药品与试剂…………………………………………………………………………………………112.1.3主要仪器与材料…………………………………………………………………………………………122.2方法………………………………………………………………………………………………………………………122.2.1母婴分离慢性内脏痛大鼠模型的建立与评估…………………………122.2.2脊髓鞘内置管术及鞘内

4、注射………………………………………………………………132.2.3qRT-PCR—检测TrkB的mRNA表达水平………………………………142.2.4Westernblot实验…………………………………………………………………………………………172.2.5旷场实验…………………………………………………………………………………………………………182.2.6图像处理…………………………………………………………………………………………………………192.2.7统计分析…………………………………………………………………………………………………………19结果……………

5、…………………………………………………………………………………………………………………………213.1母婴分离大鼠内脏敏感性显著增强……………………………………………………213.2BDNF在母婴分离大鼠脊髓的表达显著增强………………………………223.3脊髓TrkB受体参与慢性内脏高敏感中枢敏化的形成……………233.3.1TrkB抑制剂ANA-12对正常大鼠肌电反应无显著影响……243.3.2ANA-12抑制NMS大鼠内脏痛觉敏感性…………………………………2523.3.3ANA-12抑制NMS大鼠肌电反应的作用时间曲线………………263.4TrkB受体在母

6、婴分离大鼠脊髓的表达显著增强………………………273.5RealtimePCR实验结果……………………………………………………………………………293.5.1RNA完整性及纯度检测结果………………………………………………………………293.5.2引物特异性结果…………………………………………………………………………………………293.5.3TrkB受体mRNA的相对表达量……………………………………………………303.6通过鞘内注射TrkB选择性抑制剂ANA-12后，WB检测发现给药后脊髓中PKMζ蛋白表达量较给药前显著降低………………………………………313.

7、7ANA-12对正常大鼠和母婴分离大鼠的自发运动功能无显著影响，而对其情绪有一定的影响…………………………………………………………………………………33讨论………………………………………………………………………………………………………………………………………374.1新生期母婴分离导致大鼠成年出现慢性功能性内脏痛…………374.2脊髓参与慢性功能性内脏痛中枢敏化的形成………………………………384.3BDNF在慢性功能性内脏痛中发挥重要作用………………………………394.4脊髓TrkB受体参与慢性功能性内脏痛中枢敏化的形成………414.5脊髓BDNF-TrkB信

8、号通路参与NMS内脏高敏