不同产羔性状绵羊卵巢组织差异表达蛋白质的筛选与分析

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1、分类号密级UDC单位代码10733甘肃农业大学博士学位论文不同产羔性状绵羊卵巢组织差异表达蛋白质的筛选与分析ScreeningandAnalysisforDifferentialExpressedProteinsinEwesOvaryTissueofDifferentLambingPerformance贾建磊指导教师姓名张利平教授（甘肃农业大学兰州730070）学科专业名称动物遗传育种与繁殖研究方向动物遗传学理论与应用论文答辩日期2015年5月29日学位授予日期2015年6月答辩委员会主席田可川研究员评阅人陈斌教授张红平教授吕丽华教授ScreeningandAnal

2、ysisforDifferentialExpressedProteinsinEwesOvaryTissueofDifferentLambingPerformanceByJianlei-JiaSupervisor:Prof.Liping-ZhangADissertationSubmittedtoGansuAgriculturalUniversityforTheDegreeofPh.DofAnimalGeneticsandBreedingCompletedinJune2015CommencementinSeptember2012甘肃农业大学博士学位论文项目资助2015年

3、项目资助通过蛋白表达差异与动态组成研究绵羊双羔性状的信号分子及其调控机理（31260547）绵羊双羔性状分子调控机理研究（GNSW-2012~24）中华人民共和国国家外国专家局文教类高端外国专家项目（GDT20156200086）II甘肃农业大学博士学位论文摘要2015年摘要产羔性状是绵羊重要的经济性状之一，直接影响到养羊业生产的效率和成本，对养羊业的发展起到了关键性的作用。绵羊的产羔性状分为单羔性状、双羔性状和多羔性状三种，不同品种绵羊的产羔率差异较大。选育绵羊理想的产羔性状最有效的方法是掌握绵羊产羔性状的分子遗传机制和调控机理，从DNA分子角度寻找到产羔性状的主

4、效基因和分子标记，进行分子选育。绵羊的产羔数是受排卵数控制的，在卵泡发育和排卵过程中，存在一系列的细胞调控机制，涉及到多种类型蛋白质相互作用。因此，要对绵羊产羔性状的调控机理有全面和深入的认识，就必须从整体、动态、调控途径上对作用于产羔性状的蛋白质进行研究，确定绵羊不同产羔性状的主效信号分子及其传递通路，揭示绵羊不同产羔性状的分子遗传机制和调控机理，为绵羊产羔性状分子标记选育和分子育种提供理论依据。本研究开展了用TCA/丙酮沉淀法和直接裂解法提取绵羊卵巢组织全蛋白方法的比较、筛选与优化研究，利用双向凝胶电泳和质谱技术，对乏情期（蒙古羊乏情期，无角陶赛特羊和小尾寒羊间

5、情期，下同）、发情周期第1天和发情周期第11天的蒙古羊繁殖母羊（包括产单羔和双羔的母羊，简称单羔蒙古羊、双羔蒙古羊）、无角陶赛特羊繁殖母羊（包括产单羔和双羔的母羊，简称单羔无角陶赛特羊、双羔无角陶赛特羊）和产多羔小尾寒羊（简称多羔小尾寒羊）繁殖母羊的卵巢蛋白质组成及含量的动态变化进行分析，筛选不同产羔性状绵羊卵巢组织中差异表达的蛋白质，利用生物信息学方法对差异蛋白质进行亚细胞定位、GO分析（细胞组件、分子功能和生物过程）以及KEGG通路分析，构建差异蛋白质相互作用网络，以期探索绵羊不同产羔性状的分子作用机理及调控机制。⑴在相同电泳过程和操作步骤情况下获得的绵羊卵巢全

6、蛋白2-DE图谱分析发现，直接裂解法对绵羊卵巢全蛋白的提取效果优于TCA/丙酮沉淀法，其中裂解液配方为7M尿素，2M硫脲，4%CHAPS，0.5%两性电解质pH3-10，100mmol/LDTT，60mmol/LTris，20μL/mL蛋白酶抑制剂混合物时适合绵羊卵巢全蛋白质的提取。I甘肃农业大学博士学位论文摘要2015年⑵运用双向凝胶电泳技术、生物质谱技术和蛋白质生物信息学对单羔蒙古羊、双羔蒙古羊、单羔无角陶赛特羊、双羔无角陶赛特羊和多羔小尾寒羊在乏情期、发情周期第1天和发情周期第11天卵巢组织差异蛋白进行筛选和分析，结果表明，共筛选到19种差异蛋白质，其中乏情期

7、15种，发情周期第一天10种，发情周期第11天15种，差异蛋白质亚细胞定位预测结果显示19种差异蛋白质2种蛋白质位于分泌通路中（GDF9和glutathioneS-transferaseMu1-likeisoform3），3种蛋白质位于线粒体中（myosinregulatorylightchainMRCL3、glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase和nitricoxide-induciblegeneprotein），其他14种蛋白质定位于其他部位；GO分析表明，基于GO分析中的细胞组件结果得到21个注释，在细胞质（cytop