sio_2致肺泡巨噬细胞自噬对其分泌相关因子的影响

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1、中图分类号：R135.2论文编号：HBLG2015-105UDC：密级：公开硕士学位论文SiO2致肺泡巨噬细胞自噬对其分泌相关因子的影响作者姓名：朱会兴学科名称：基础医学研究方向：肺纤维化学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2015年4月19日申请学位类别：医学硕士导师姓名：高俊玲教授单位：华北理工大学基础医学院论文评阅人：匿名单位：匿名单位：论文答辩日期：2015年6月6日答辩委员会主席：张雷教授关键词：矽肺；肺泡巨噬细胞；3-MA；自噬；FB唐山华北理工大学2015年6月EffectsofSiO2-inducedAu

2、tophagyinAlveolarMacrophageonSecretionoftheRelatedFactorsDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicinebyZhuHuixing(BasicMedicine)Supervisor:ProfessorGaoJunlingJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈

3、交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内

4、容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要目的采用体外培养细胞的方法，使用SiO2体外刺激染尘法制备细胞损伤模型。探讨：1自噬抑制剂3-MA(3-methyladenine，3-MA)对肺泡巨噬细胞(Alveolarmacrophages,AM)自噬的调控及其释放炎性因子的影响；2AM上清液对肺成纤维细胞(Fibroblast,FB)所产生的影响。方法1模型制备及分组：应用肺灌洗法收集A

5、M，体外暴露AM染尘的方法制作模型，在染尘成功12h后，给予自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤干预（10mmol/L）。取10只胎鼠用于FB分离及培养，并使用各组的AM上清液分别对FB进行干预刺激。并于干预后6h、18h、24h、36h用胰酶消化，收集体外培养的细胞。分组：将30只雄性SPF级SD大鼠（体重190~220g）肺灌洗出的AM随机方法分成三组：AM组（对照组）、AM+SiO2组（SiO2组）、AM+SiO2+3-MA组（3-MA组）；用各组的AM上清液刺激分别为，AM上清+FB组（对照干预组），AM上清+SiO2+FB组（SiO

6、2+FB组），AM上清+SiO2+3-MA+FB组（3-MA干预组）。2检测指标及方法：○1一般形态学观察：使用HE染色的方法检测AM形态学改变；○2免疫细胞化学染色法检测LC-3，Beclin-1，TNF-α，TGF-β的表达及分布；○3免疫印迹法检测LC-3，Beclin-1，TNF-α，TGF-β，I、III型胶原的蛋白表达量。3统计学分析：使用免疫细胞化学法检测细胞阳性度，并用Image-ProPlus6.0图像分析软件进行半定量分析，用积分光密度值（IOD值）表示。蛋白定量使用ImageJ图像分析处理软件对蛋白所反应的条

7、带进行半定量分析，得到光密度值（OD值），以目的蛋白的OD值比内参（β-actin）OD值的比值，做为基础对照进行对比。在本实验中获取的实验数据结果使用Excel建立，用均值±标准差（x±s）体现，使用SPSS16.0系统将所得数据随机的单因素方差分析，两组间的比较采用qq检验的方式，用P<0.05表示差异具有统计学意义。结果1AM的形态学检测结果：HE染色结果显示，对照组中AM呈现出圆形或椭圆形，细胞结构较清晰，形态均一，并没有发现矽尘颗粒。同对照组相比较，模型组AM的体积出现明显变大，多为不规则形状，细胞核为嗜碱性染色，细胞

8、核大多居于细胞的中间部位或靠近边缘，细胞胞质相对较丰富，有些AM的细胞胞浆内可发现矽尘颗粒。2免疫细胞化学染色检测结果：LC-3，Beclin-1，TNF-α，TGF-β均为胞浆表达，对照组LC-3，Beclin-1，TNF-α，TGF-β仅有微弱