phb2表达沉默对横纹肌肉瘤细胞肿瘤生物学行为的影响及作用机制的初步研究

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1、２０２２６学校代码：１０２００研究生学号：１１０１３分类号：整密级：雜东批知這硕±学位论文ＰＨＢ２表达风默对橫钱肌巧巧细胞肿巧生物学巧为的化的＆作用机制的巧步巧巧ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＰＨＢ２ｓｉｌｅｎｃｅｏｎｔｕｍｏｒｉｂｉｏｌｏｉｃｃｈａｒａｃ化ｒｓｏｆＲｈａｂｄｏｍｏｓａｒｃｏｍａｃｅｌｌｓｇｙ作者：巧巧巧指导教师：乌巧巧巧孙陆果教巧一级学科：生物学二级学科：细胞生物学研究方向：肿巧机制研究学位类型：学术硕±东

2、北师范大学学位评定委员会２０１５年６月１１１１３６学校代码：０２００研究生学号；２０２０２分类号：坚密级：馨《批畔這硕±学位论文ＰＨＢ２表达风默对横纹肌巧瘤细胞肿瘤生物＂学巧為的景式咖＆作用初？制的初步研免ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＰＨＢ２ｓｉｌｅｎｃｅｏｎｔｕｍｏｒｉｂｉｏｌｏｇｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆＲｈａｂｄｏｍｙｏｓａｒｃｏｍａｃｅｌｌｓ作者：常巧巧指导教师：乌巧教授孙陆果教授－级学科：生物学二级学科：细胞生物学

3、研究方向：肿瘤机制研究学位类型：学术硕±东北师范大学学位评定委员会２０１５年６月独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下独立进行研究工作所取得的成果。据我所知，除了特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。对本人的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明。本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：單巧巧曰期：：＾／．ｃｉ学位论文使用授权书本学位论文作者完全了解东北师范大学有关保留、使用学位论文的规定：，即东北师范大

4、学有权保留并向国家有关部口或机构送交学位论文的复印件和电子。版，允许论文被査阅和借阅本人授权东北师范大学可Ｗ将学位论文的全部或部、、分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印缩印或其它复制手段保存汇编本学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：窜巧巧指导教师签名：ｈｉ，日期：、＾｜Ｃ占日期；广学位论文作者毕业后去向；工作单位；电话；通讯地址；；邮编摘要ＰＨＢ２（Ｐｒｏｈｉｂｉｔｉｎ２３７ＫＤ）是进化上，高度保守的多功能蛋白，广泛分布于细菌、

5、酵母、原虫、桂物、果魄Ｗ及哺乳类等多种生物细胞中，参与细胞的増殖、分化、迁移、调亡及线粒体形态发生等生理过程，Ｗ及调节细胞周期、基因转录、和细胞内信号转导。然而，对ＰＨＢ２的研究仍处于初级阶段，很多功能及机制仍不清晰。横纹肌肉瘤（Ｒｈａｂｄｏｍｙｏｓａｒｃｏｍａ是源于向横纹肌分化的原始间叶细胞，并由）不同分化程度的横纹肌细胞组成的软组织恶性肿瘤。临床表现的多样性、病理改一变的多重性Ｗ及发病部位的多变性，使横纹肌肉瘤成为最复杂的小儿肿瘤之。我们前期的研究发现ＰＨＢ２能抑制骨骼肌的分化，而横纹肌肉瘤正是骨骼肌祖

6、细胞过度増殖及分化缺陷为主要特征，这些证据提示ＰＨＢ２与横纹肌肉瘤形成可一能具有定的相关性。故本文采用ＲＮＡ干涉技术，使ＲＤ细胞系（Ｒｈａｂｄｏｍｙｏｓａｒｃｏｍａｃｅｌｌｓ）中的ＰＨＢ２表达沉默，观察ＰＨＢ２表达沉默对ＲＤ细胞増殖、分化、迁移等方面的影响并对相关作用机制进行初步探究一ＰＨＢ２，为进步探究在横纹肌肉瘤发生发展过程中的生物学作用提供实验基础和理论依据。主要研究内容如下：１、通过实时阻抗细胞分析技术检测到ＰＨＢ２表达沉默后，ＲＤ细胞活力降低。流式细胞术的结果显示，ＰＨＢ２表达沉默后细胞Ｇ１期的

7、比例増加，细胞被阻滞在Ｇ１／Ｓ期，从而抑制了ＲＤ细胞的増殖；２、软琼脂中克隆形成实验显示ＰＨＢ２表达沉默后，ＲＤ细胞的错定非依赖性克隆形成能力下降，说明ＲＤ细胞的转化特性减弱；３、在ＲＤ细胞中，部分ＰＨＢ２疑似特异地定位于细胞核的核仁区域，而且ＲＴ－ＰＣ民方法初步证明了ｒＰＨＢ２表达沉默后，核仁中合成的４５ＳＲＮＡ含量下调，提示ＰＨＢ２可能参与核仁功能的调控，送可能是其参与调控ＲＤ细胞増殖过程的机制之一；４、ＰＨＢ２表迭沉默后，ＲＤ细胞中肌细胞分化前期标志物ｍｙｏｇｅｎｉｎ的表达量上调，说明ＰＨＢ

8、２表达沉默能増强ＲＤ细胞的分化能力。通过巧光素酶报告基一ＰＨＢ２表达沉默后ｍｏｅｎ因活性检测进步证明ｉｎ的启动子活性増加ｙｇ，提示了ＰＨＢ２与细胞分化相关的一种可能的机制；５、采用Ｔｒａｎｓｗｅ