ndv f48e9株感染鸡pbmc差异蛋白分析以及ilk和cypa对ndv复制增殖的影响

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1、中文摘要NDVF48E9株感染鸡PBMC差异蛋白分析以及ILK和CyPA对NDV复制增殖的影响新城疫是由新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）引起的一种急性、高度传染性的禽类传染病，对全球家禽业一直具有严重的威胁。外周血单个核细胞（Peripheralbloodmononuclearcells,PBMC)是一类重要的免疫效应细胞，不仅能够对机体感染及疾病的发生进行监测，而且是固有免疫和获得性免疫重要的组成部分。早期研究表明PBMC是NDV的主要靶细胞，NDV感染可引起PBMC凋亡，从而导致免疫抑制使机体免疫力降低。本研究利用基于2-DE和MALDI-TO

2、F/TOF-MS的高通量蛋白质组学方法对感染NDV前和感染NDV后PBMC进行比较蛋白质组学分析。共鉴定出13种在感染NDV前，感染后3天和感染后5天三个阶段均表现为持续上调或持续下调趋势的蛋白质。根据差异表达蛋白质的功能可分为大分子的生物合成、细胞骨架、能量代谢、应激反应和信号转导五个功能群。这些差异表达蛋白提现了PBMC在感染NDV后胞内环境的总体变化，对这些差异表达蛋白的功能进一步研究，会促进对NDV强毒株免疫抑制机制的理解。采用瞬时转染pFLAG-CMV-2-ILK和siILK分别上调表达和下调表达的方式研究ILK对NDV复制增殖的影响。NDVF48E9株分别接种转染组（

3、转染pFLAG-CMV-2-ILK或者siILK）、未转染组（notreat）和MOCK组（转染空质粒或者siScr），利用实时荧光定量PCR和TCID50方法分别检测三组细胞培养上清中NDV的RNA拷贝数和病毒感染滴度。结果表明，当ILK上调表达，DF-1/ILK组培养上清中的病毒感染滴度和NDV基因组RNA拷贝数在接毒后36h、48h、60h到72h均明显高于DF-1细胞组和MOCK组。而当ILK下调表达，DF-1/siILK组培养上清中的病毒感染滴度和NDV基因组RNA拷贝数在接毒后36h、48h、60h到72h均明显低于DF-1细胞组和MOCK组。表明ILK上调表达可促进

4、NDV的复制增殖,ILK下调可降低NDV的复制增殖，ILK对NDV的复制增殖是正调节作用。结合第一章蛋白组学结果，NDV感染后ILK表达下调，说明其在NDVI感染过程中起负调节作用。采用瞬时转染pFLAG-CMV-2-CyPA上调表达的方式研究CyPA对NDV复制增殖的影响。F48E9株NDV分别接种DF-1组（notreat）、DF-1/CyPA组（转染pFLAG-CMV-2-CyPA质粒）和MOCK组（转染siScr）,实时荧光定量PCR和TCID50方法检测细胞培养上清中NDV基因组RNA拷贝数和病毒感染滴度。结果表明DF-1/CyPA组的培养上清中的NDV基因组RNA拷贝

5、数和病毒感染滴度在48h、60h到72h均明显低于DF-1细胞组和MOCK组。说明CyPA的上调表达可抑制NDV的复制和增殖。结合第一章蛋白组学结果，NDV感染后CyPA表达上调，说明其在NDV感染过程中起负调节作用。本研究所获得的结果可帮助深入了解体内靶细胞对NDV感染的分子水平反应，这将有助于理解NDV的致病机理。关键词：外周血单个核细胞，新城疫病毒，整合素连接激酶，亲环素蛋白A，蛋白质组学AbstractProteomicanalysisofchickenPBMCsinfectedbyNDVF48E9strainandtheimpactofILKandCyPAonNDVre

6、plicationandproliferationNewcastleDisease(ND)isanacuteandhighlypathogenicavianinfectiousdiseasecausedbyNewCastleDiseasevirus(NDV),continuouslyposingthreatstoworld-widepoultryindustry.Peripheralbloodmononuclearcells(PBMCs)areimportantimmunologicaleffectorcells,whichcouldnotonlymonitortheinfect

7、ionanddiseasestatus,butalsoareanimportantintegralpartofinnateandacquiredimmunity.PreviousstudiesrevealedthatPBMCsaretheprimarytargetsofNDVthatNDVinfectionmayleadtoapoptosis,therebyresultinginimmunosuppressionandreducedavianresistance.Inthisst