十种中药成分对cef增殖和抵抗ndv感染的影响

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1、+种中药成分对CEF增殖和抵抗NDV感染的影响+胡元亮孔祥峰王德云刘家国张宝康(南京农业大学中兽医学研究室江苏南京210095)摘要：分别将5种浓度的黄芪多糖(APS)、当归多糖(CAPS)、淫羊藿多糖(EPS)、板蓝根多糖(IRPS)、蜂胶多糖(PPS)、黄芪黄酮(AF)、淫羊藿黄酮(EF)、蜂胶黄酮(PF)、黄芪皂甙(AS)和人参皂甙(GS)等十种中药成分加入到培养24h的鸡胚成纤维细胞(CEF)中，再培养12h后接种新城疫病毒(NDV)，于病毒接种后72h用中性红染料吸收法测定CEF活性以评价各

2、中药成分对细胞增殖及其抵抗病毒感染的影响。结果表明，十种中药成分均能不同程度地促进细胞增殖和抵抗病毒感染．前者以AF、APs、IRPS、PF和GS，后者以GS、IRPS和EPs的作用较强，部分中药成分在两方面作用中各有所长，且有一定的量效关系。关键词：中药成分；细胞增殖；抗病毒作用中药的治疗作用基于它的化学组成，多糖、皂甙和黄酮是关键成分，具有增强免疫、促进细胞生长等多种作用”41。然而，对这些中药成分作用的强弱比较未见研究报道。笔者提取了黄芪多糖(astragaluspolysaccharide，A

3、PS)、当归多糖(chineseangelicapolysaccharide，CAPS)、淫羊藿多糖(epimediumpolysaccharide，EPS)、板蓝根多糖(isatisrootpolysaccharide，raps)、蜂胶多糖(pr叩ohspolysaccharide，PPS)、黄芪黄酮(astragalusflavone，AF)、淫羊藿黄酮(epimediumflavone。EF)、蜂胶黄酮(propolisflavone，PF)、黄芪皂甙(astragalosides，AS)和人参

4、皂甙(ginsenosides，GS)等十种中药成分，并测定了它们对体外培养鸡胚成纤维细胞(chickembryofibroblast，CEF)的安全浓度【4】。本研究进一步运用细胞培养的方法，测定了这十种中药成分对CEF增殖及其抵抗NDV感染的影响，旨在探讨中药成分的免疫增强作用和机理，以筛选出免疫增强作用较好的中药成分，为研制新型免疫增强剂提供理论依据。1材料与方法1．1中药准备APS、CAPS、IRPS、EPS、PPS、AF、EF、PF、AS和Gs，由南京农业大学中兽医学研究室提供。根据对CEF

5、安全浓度的测定结果嗍．用细胞维持液分别稀释成高、次高、中、次低、低5种浓度(见结果中各表，单位pg／ha)，常规消毒后备用。1．2病毒准备新城疫病毒(Newcastlediseasevirus，NDV)IV系(Lasota株)疫苗，中牧股份南京+基金项目：国家自然科学基金资助项目(30070566)作者简介：胡元亮(1953一)，男，博士．教授，博士研究生导师。药械厂生产，批号为760．3。用9日龄SPF鸡胚传代2次，按Reed．Muench法‘51测定CEF半数组织培养感染剂量(TCID50)，用细

6、胞维持液配成IOOTCID50浓度备用。1．3试剂准备MEM培养基．Gibco公司产品，按说明书配制，再加入犊牛血清达5％为细胞生长液、2％为细胞维持液，再按常规量加入谷胺酰氨和双抗。胰蛋白酶，进口分装，用PBS(pH7．4)配制成0．25％的溶液，0．22um混合纤维素酯微孔滤膜过滤除菌，分装后一20"C保存备用：中性红，上海试剂三厂生产，批号080525。用153mmol／ml的NaCI溶液配制成0．05％的溶液，8磅高压灭菌，4"C避光保存。脱色液，用50％乙醇溶液配成含NaH2P040．05m

7、ol／ml的溶液。1．4主要仪器CO：培养箱，美国Revco公司生产；倒置显微镜，重庆光学仪器厂生产；酶联免疫检测仪，华东电子管厂制造；96孔细胞培养板和24孔细胞培养板，德国Nunclon公司生产。1．5试验方法根据文献5介绍的方法制备CEF，将细胞数调整至5×1054"／ml后加入到96孔细胞培养板中，每孔1001．t1，3TC、5％C02条件下培养至剐形成单层后．倒掉iL内液体，用细胞维持液洗3次，开始分组加药。每种浓度的中药成分设8孔，每孔加入含中药成分的细胞维持液100uI。培养12h待细胞

8、成致密单层后，倒掉孔内液体，用细胞维持液洗3次，再均分为2组：中药．病毒组，4孔，每孔加入含病毒(100TCIDso)细胞维持液100u1；中药组，4孔，仅加入细胞维持液。每两种中药成分(用同一块细胞板)同时设细胞对照组，4孔，中药、病毒均不加；病毒对照组，4孔，不加中药、接种病毒；另设无细胞对照孔，只加营养液，作为测定时的空白调零孔。加样完毕继续培养，于病毒接种后72h测定CEF活性。1．6cEF增殖测定方法采用中性红染料吸收法㈣。即，测定前2h每孔加