nafld小鼠th17通路变化及白藜芦醇作用机制的初步探讨

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1、授予单位代码10089学号或申请号20122050HebeiMedicalUniversity硕士学位论文科学学位NAFLD小鼠Thl7通路变化及白藜芦醇作用机制的初步探讨研究生：李微导师.•姚冬梅副教授专业：内科学二级学院：第二医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试

2、验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承想相应法律责任。级学院领导盖阜广研究生签名：座撒导师签如『年I月•曰河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人己经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰与，文贝自负。目录中文摘要………………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………………4英文缩写………………………………………

3、………………………………7研究论文NAFLD小鼠Th17通路变化及白藜芦醇作用机制的初步探讨前言………………………………………………………………………8材料与方法………………………………………………………….….10结果..……………………………………………………………………23附图..……………………………………………………………………27附表..……………………………………………………………………45讨论..……………………………………………………………………47结论..………………………………………………………………

4、……52参考文献..………………………………………………………………53综述肝纤维化相关免疫学机制研究进展..….…………….……………..58致谢..…………………………………………………………………………74个人简历..……………………………………………………………………75中文摘要NAFLD小鼠Th17通路变化及白藜芦醇作用机制的初步探讨摘要目的：1建立非酒精性脂肪性肝病的动物模型。2初步探讨Th17通路在非酒精性脂肪性肝病中的作用及白藜芦醇对其作用机制的初步研究。方法：本实验采取随机-对照的研究方法。将SPF级雄性

5、C57BL/6小鼠按照随机数字表进行随机分组。（1）60只雄性C57BL/6小鼠，6-8周龄，自由摄食AIN93对照饲料7天后，随机分为Control组、高脂饮食（Highfatdiet,HFD）组及西方饮食（Westerndiet,WD）组，Control组16只，HFD组及WD组分别22只。分别给予对照饲料、高脂饲料、高脂饲料加高糖饮用水（42g/L），造模时间33周。从WD组中随机抽取12只小鼠，每组6只，分别给予白藜芦醇（resveratrol,Res）及羧甲基纤维素（carboxymethylcelluloses

6、odium,CMC）45mg/kg/day灌胃，继续喂养6周后处死小鼠。（2）定期观察小鼠的进食、精神状态及毛发光泽度等，每周测量小鼠体重并记录。（3）观察各组小鼠肝脏外形变化，记录肝重，计算并比较肝重指数。（4）应用苦味酸-天狼猩红及苏木素-伊红（hematoxylinandeosin,HE）染色观察肝组织病理学的改变。（5）检测血清白细胞介素-17（interleukin-17,IL-17）、甘油三酯（Triglyceride,TG）、天冬氨酸氨基转移酶（Aspartateaminotransferase,AST）及丙

7、氨酸氨基转移酶（Alanineaminotransferase,ALT）的变化情况。（6）应用实时荧光定量PCR（Real-timefluorescentquantitationPCR,Real-timeqPCR）方法检测肝组织中TGF-βmRNA、IL-22mRNA、RORγtmRNA及IL-17AmRNA的表达情况。（7）提取肝、脾组织中的淋巴细胞，行流式细胞学检测，了解肝、脾组织中+CD4/CD8比值及CD4T细胞IL-17、RORγt的表达情况。(8)应用免疫组织化学的方法检测肝脏组织中α-SMA的表达情况。结果：

8、（1）HE及苦味酸-天狼猩红染色显示，Control组肝脏肝细胞大小及排列正常；HFD组和WD组形成非酒精性脂肪性肝炎及肝纤维化，造模成功；与WD+CMC组比较，WD+Res组肝纤维化程度明显减轻（P＜0.05）。（2）与Control组比较，HFD组和WD组血清ALT、AST及TG明显升高，差异有统计