mirnas对断奶仔猪大肠杆菌抗性的调控作用及机制分析

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1、．．一，＇，９１２０２却术Ｊ呼ＶＪＩＩＭ密级—．－■－Ａｉｆｅ，，若赛、壤叫义聲ＩＹａ＼ＮＣ．／１Ｉ０ＵＬＩＮＩＶＬＲＳＩＴＹｊ伴壬学隹冷文ｍｉＫＩＮＡｓ对断奶仔猪大肠杆菌抗性的调控作用及化制分析－＇＾渗心美爛王金玉教授大学？，江若接碱，２２洲０９指导教师姓名：，扬州＾片心吴圣龙研究员，扬州大学，江苏扬州，２２５００９申淸学位级别；博去学科专业名称；动物遗传育种与繁殖２０１５６２０１５论义提交日期：年月论文答辩日期：年５月２０１５学位授予单位：扬州大学学位授予日期：年６月答辩委员会主席：徐宁迎教授

2、．Ａ转基因生物新品种培育科技重大专项（Ｎｏ．２０１４ＺＸ０８００６（ｎＢ）ＮａｔｉｏｎａｌＭａｏｒＴｅｃｈｎｏｌｏＰｒｏｅｃｔｓｏｆＧｅｎｅｔｉｃａｌｌＭｏｄｉｆｉｅｄＯｒａｎｉｓｍｓｊｇｙｊｙｇＢ化ｅｄｉｎｇＮＯ．２０１４ＺＸ０８００６０化（）国家自然科学基金Ｎｏ．３１１７２１８３Ｎｏ．３１１４００２７（，）ＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｕｎｄｓＮｏ．３１１７２１８３Ｎｏ．３１１４００２７（，）江苏高校化势学科建设工程资助项目ＰＡＰＤ（）ＰｒｉｏｒｉｔｙＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｏｒａｍＤｅｖｅｌｏｍ

3、ｅｎｔｏｆＪｉａｎｓｕＨｉｈｅｒＥｄｕｃａｔｉｏｎｇｐｇｇＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓＰＡＰＤ（）曹臣：ｍｉＲＮＡｓ对断巧巧猪大肠杆菌抗性的调控作用及化制分析Ｉ目录１摘要ＡＢＳＴＲＡＣＴ５１０符号说明主要仪器设备１２主要数据库及网址１３１４１仔猪腹泻与￡．ＣＯ／ＺＦ１８致病机理４１’２￡．ｃｏ／！Ｆ１８抗性相关的分子研究１５ｉＲＮＡ及１３ｍｃｒｏ其调拉作用６４基因修饰技术１８５本研巧的目的和意义１９第二章ｍｉＲＮＡｌ％及其靴基因对苏太断奶仔猪大肠杆菌抗性的作用分析２１一Ｒ２１第

4、节基于定量ＰＣ技术检测大肠杆菌熟附水平方法的建立１２１材料方法１．１＃料２１１．ＣＲ扩增２引物设计及Ｐ２２１．量标准曲线的制定２２３实时巧光定１．４ＤＮＡ提取２２大肠杆菌黏附肠上皮细胞及．１５数据分析２３２２３结果与分析２．２３１ＰＣＲ扩増产物鉴定２．２标准曲线２４２．３定量检测细菌相对黏附及数据分析２４３職２６ｌ％铅基因预测及其关键视基因的靴向蹈证第二节ｍｉＲＮＡ２８１材料与方法２８１１２８．试验材料－１．２ｍｉＲ１９２２８在不同物种中的保守性分析－．１３ｍｉＲ１９２銷基因预测及功能分

5、析２８１．４正ｃｏ＂Ｆ１及功能分析８大肠杆茜抗性相关的铅基因筛选２９’－１．ＵＴＲ靴点区域的ｌｉ列合成５餓基因３ｏｇｏｓ序巧１．６双英光素酶报告载体的构建巧．１７细胞转染３０１．８双巧光素酶活性检测３０２３０结果与分析－２．１ｍｉ艮１９２保守性３０２－．２１９２３１猪ｍｉＲ勒基因预测及功能２．３ＥｃｏＵＦ１８４大肠杆菌感染相关的销基因筛选３ｕ扬州大学博去学位论文Ｉ２－．４ＡｔＣＷ和公基困３ＵＴＲ双巧光素酶报告载体３４２．５巧光素酶报告基因活性检测３５３讨论３６第Ｈ节关键铅基因（占王Ｇ５、＾王Ｃ

6、＾）的差异表达分析巧１欄与施３９１．１试验动物３９１．２试剂４０１．３巧光定量弓４０Ｉ物设计与合成４－１ｌｔｉｍｅＰＣ艮．总ＲＮＡ抽提及Ｒｅａ反应４０１．５数据分析４０２结＊４１２１巧光定量引物ＰＣＲ验证情况４１．２．２公从Ｗ巧乂ｔＣＡＷ基因在苏太猪大肠杆菌抗性敏感群体间的表达４１２．３化６５和乂＾（：＾＾基因在苏太猪不同日龄个体中的表达４２３讨论４３－第四节大肠巧菌侵染对ｍｉＲ１９２及其关键铅基因转录水平的影响４６１材料与方法４６１１试验材料４６．－１．２大肠杆菌及培养上清液侵染ＩＰＥＣ］２细

7、胞４６－１．３ｍｉＲ１９２反转录和定量检测４７１．４靴基因转录水平的检测４７２鄉与備４７２－－．１大肠杆菌侵染对ＩＰＥＣＪ２细胞中ｍｉＲ１９２的影响４７２．２关键範基因表达４８３龍４８第五节ｍｉＲＮＡ１９２敲除及其功能验证５０１材輯和方法５０１．１材料５０１．２ＴＡＬＥＮ识别序列设计５０１．３ＴＡＬＥＮ左右臂载体组装连接及鉴定５１１４５２．嘿岭霉素最