tap1基因对断奶仔猪f18大肠杆菌抗性和部分免疫指标的效应分析

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1、TAPl基因对断奶仔猪F18大肠杆菌抗性和部分免疫指标的效应分析转基因生物新品种培育科技重大专项(2009ZX08006．004B)NationalMajorTechnologyProjectsofGeneticallyModifiedOrganismsBreeding(2009ZX08006—004B)国家自然科学基金(3172183，31140027)NationalNaturalScienceFunds(31172183，31140027)扬州大学动物科学与技术学院2012年5月潘章源：TAPI基因对断奶仔猪F18大肠杆菌抗性和部分免疫指

2、标的效应分析TAPl基因对断奶仔猪F18大肠杆菌抗性和部分免疫指标的石慧譬芝竺IYIl2112llM587IIIIIIIIIllllll5lllU螋研究生：潘章源。--VV。V’导师：包文斌副教授吴圣龙研究员专业：动物遗传育种与繁殖中文摘要F18大肠杆菌是目前养猪业中最普遍、危害最大的肠毒素大肠杆菌病原之一，它可以通过菌毛粘附在小肠上皮细胞上，进而产生肠毒素，引起断奶仔猪腹泻(porcinepost．weaningdiarrhea．PWD)。尽管当前对仔猪腹泻的一些预防性措施(如提高管理水平、改善卫生环境、注射药物以及亚单位疫苗接种等)，在一定

3、程度上减少了该病的发生，但并没有从根本上消除断奶仔猪腹泻和水肿病的发生与流行，采用遗传学方法从遗传本质上提高猪对病原的抗性，对开展抗病育种具有治本的功效。抗原处理相关转运体(Transporterassociatedantigenprocessing，TAP)(TAPl是TAP蛋白亚基之一)是细菌内源性抗原肽(如肠毒素)的运输载体，在免疫反应中起着重要的作用。本试验对TAPl基因多态性、基因表达谱和上游序列CpG岛甲基化修饰状态进行系统检测，结合部分免疫应答指标的测定，分析和探讨TAPl基因的遗传变异对断奶仔猪F18大肠杆菌抗性和免疫应答能力的

4、关系，以期为下一步有效分子标记的获得以及TAPl基因调控机制的研究奠定基础。主要试验结果如下：1．采用PCR．RFLP方法对11个猪群体TAPl基因外显子2的多态性进行了检测，共检测到1个等位基因，AA、AB和BB3种基因型，其中藏猪仅检测到AB和BB型，其他猪群体中均存在3种基因型。11个群体中等位基因B的频率为0．44一o．95，总体上等位基因B为优势等位基因。大白猪、长自猪、杜洛克和苏太猪群体中BB基因型频率较高，分别为0．906、0．826、0．736、0．603。测序结果发现1个突变位点G729A，为同义突变，没有引起氨基酸的改变。卡

5、方适合性检验结果显示：除了苏太猪和藏猪显著偏离Hardy．Weinbery平衡(P<0．01)外，其余猪种均处于Hardy．Weinbery平衡状态(P>0．05)。2．应用荧光定量PCR方法对从初生到断奶不同日龄(8、19、30和35日龄)、不同猪群体断奶仔猪(苏太猪F18抗性型群体、梅山猪和大白猪)、苏太F18大肠杆菌抗性和敏感型断奶仔猪的11个组织TAPl基因进行差异表达分析，检测结果显示：TAPl基因在11个不同组织中广泛表达，在肺、十二指肠、空肠以及免疫组织脾、胸腺、淋巴组织中高度表达，其中肺和空肠表达量最高，表明TAPl基因的表达可

6、能与肺部疾病和肠道疾病的抗性相关。在不同日龄的仔猪中，8、18、30日龄仔猪TAPl表达水平比较低且无显著性差异(尸

7、型个体的表达量，在各个组织中TAPl表达量差异倍数从1．430到4．579不等，在胸腺、淋巴结、空肠、十二指肠中表达差异达到4．579、2．822、2．512、1．892。这进一步表明了TAPl基因可能与F18大肠杆菌抗性相关。在不同猪群体中，梅山猪和大白猪之间TAPl表达量无显著性差异，但苏太猪F18大肠杆菌抗性型群体TAPl表达量明显高于梅山猪和大白猪，且其中在肝、肺、淋巴结组织中达到显著水平(尸<0．05)，在胸腺、脾、十二指肠和空肠组织中达到极显著水平(P<0．01)，这一结果同样也表明TAPl基因可能与F18大肠杆菌抗性相关。综合上述

8、结果，表明TAPl基因表达量的上调可能与断奶仔猪F18大肠杆菌抗性和免疫应答有关。TAPl基因外显子2G729A变异位点3种基因型个体的表达结果分析显