mircorna-27a靶向调控bmscs分化预防激素性股骨头坏死的实验研究

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1、学校代码10459学号或申请号201212443315密级公开鄞州kI硕士学位论文MircoRNA-27a靶向调控BMSCs分化预防激素性股骨头坏死的实验研究作者姓名：李明导师姓名：王义生教授：学科门类：医学专业名称：外科学（骨科）培养院系：郑州大学第一附属医院完成时间：2015年3月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研宄所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研宄作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律贵任由本人承担。学位论文作者II

2、期：2^#>月^日学位论文使用授权声明本人/王导师指导F完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。报据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电了•版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入_关数据库进行检索，可以米用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第…署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：4叫H期丰夕月斤日AthesissubmittedtoZhengzhouUn

3、iversityforthedegreeofMasterThestudyoftheeffectsofmiR-27aregulationtargetingbonemarrowmesenchymalstemcellsonsteroid-inducedosteonecrosisofthefemoralheadByMingLiSupervisor:Prof.YishengWangMedicineOsteopathicTheFirstAffiliatedHospitalofZhengZhouUniversityMarch2015摘要摘要背景与目的：激素性股骨头坏死（osteonec

4、rosisofthefemoralhead,ONFH）有极高的致残率，其预防和治疗已经成为世界性的难题。激素性ONFH发生可能是由于激素的作用改变了细胞中的一些miRNA表达，影响了相应靶向基因调控作用，从而使正常骨髓间充质干细胞(Bonemarrowmesenhymalstemcells,BMSCs)的分化受到影响，造成了大量脂肪细胞的生成，和成骨细胞形成的大量减少，影响了正常骨细胞的修复。因此促进成骨细胞的分化和减少成脂细胞的分化是我们预防和治疗激素性ONFH最要的环节。以往的研究通过单一基因的改变来预防骨坏死，而本研究主要是利用miRNA具有多个靶向位点，筛选出具有

5、抑制成脂肪分化同时具有促进成骨分化的MicroRNA-27a基因，采用目前较成熟的RNA干扰（RNAinterference，RNAi）技术，通过将双向调控基因MicroRNA-27a电转入大鼠BMSCs中，运用细胞学、生物化学和分子生物学等多种的检测手段和方法检测该基因对于成骨和成脂的影响。在国内外的报道中，尚未有miRNA双靶向基因调控预防激素性ONFH。材料与方法：选用2~3月龄的SD大鼠，体重约为180~200g，处死后取骨髓细胞，培养并制备大鼠BMSCs。将实验分为4组，MicroRNA-27a组（miRNA1，M）：将具有双向靶向作用的MicroRNA-27a

6、电转入大鼠BMSCs中并且加入激素诱导；阴性对照组（NegativeControl，NC）：将无效序列的基因电转入大鼠BMSCs中并在培养基中加入激素诱导；激素模型组（Model，M）：将BMSCs单纯的给予激素诱导；正常对照组（Normal，N）：无需特殊因素处理；对于激素诱导的各组细胞中保持地塞米松浓度为10-7mol/L，按时更换细胞液并定期观察细胞的形态及。在激素诱导第3天和第7天时，采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)技术分别测定各实验组中的PPARγmRNA、BMPmRNA的相对表达量。在激素I摘要诱导14天时，采取ELISA试剂盒测定各实验组中的

7、骨钙素分泌量和甘油三脂的含量。在诱导14天时，对各组细胞进行免疫组化，记录并分析各组PPARγ、BMP蛋白表达水平。诱导21天时用油红O方法对各组细胞进行细胞染色，用倒置显微镜观察并记录脂肪细胞的数量。结果1各实验组PPARγmRNA和BMPmRNA表达检测结果:实验第3天和第7天，测得阴性对照组和激素模型组中的PPARγmRNA呈高表达，与正常对照组相比较，差异值有统计学意义（P<0.05）。MicroRNA-27a组中的PPARγmRNA呈低表达，与正常对照组无统计学差异（P>0.05）。阴性对照组和激素模型组中的BMPm