microrna调控骨髓干细胞治疗激素性股骨头坏死的实验研究

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1、非京诚如皆爭像博±研究生学位论文北京协和医学院研究生院中国医等科学院北京巧巧医学巧诗±巧巧生学位论文学校代码：１００２３：Ｂ２０学号１３００１０７４博：ｔ学位论文专业学位ｍｉｃｒｏＲＮＡ调控骨髓干细胞治巧激素性肢骨失坏死的实验研究Ｔｈｅｓ＜：ｕｄｙｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｉｎｒｅｇ山ａｔｉｎｇ化ｅＭＳＣｆｏｒ化ｅｓｔｅｒｏｉｄｉｎｄｕｃｅｄｏｓｔｅｏｎｅｃｒｏｓｉｓ所院：北京协和医院姓名：董玉雷指导教师：翁习生教授导

2、师小组：赵宏教授吴志宏教授学科专业：外科学（骨外科学）研巧方向：关节外科完成日期：２０１５年４月１中国医学群院化京协巧医学院巧±研維学位论文目录中娜要３Ａｂｓｔｒａｃｔ６前胃９一第部分ｍｉｃｒｏＲＮＡ调控骨髓干细胞治疗激素性股骨头坏死的实验研究巧材料与方法１４实验材料１４实验施１６实验结果２３Ｗ论３１３４第二部分特立帕肤治疗大鼠激素性股骨头坏死的实验研究３５材料与方法３５实验材料

3、３５实验方法：＾６实验结Ｓ４０论４３结论４５，参考文献４６文献综述５３干细胞治疗股骨头坏死的研巧进展巧附录６２缩略词表６２个人龍６４致谢６６独创性声明６７学位论文版权使用授权书６７２中国医学科学院北京巧和医学院博±研宛生学位论文中文摘要研巧；背景：激素性股骨头坏死是骨科常见疾病，其致残率高，保守治疗效果欠佳。激素导致骨髓间充质干细胞成骨分化能力下降是其中的一个重要机制。课题组前期通过ｍｉ

4、ｃｒｏＲＮＡ苍片技术，筛选出激素性股骨头坏死患者与正常健康人骨髓间充质干细胞增殖分化过程中ｍｉＲＮＡ表达谱的差异特征，并将其与正常健康人骨髓间充质干细胞经大剂量激素刺激前后的ｍ一ｉＲＮＡ表达差异谱进行比较，找到表达变化致的—－Ａｓｃｒｏ－２］ａｍｉＲＮｍｍｉｃｒｏＲＮＡｍｉｍｃｓｎｈｏｒ，为ｉＲＮＡ２］ａ＞并进步构建ｉ和ｉｉｂｉｔ，进一ｍ－２３ａ步发现上调ｉｃｒｏＲＮＡ可Ｗ导致骨髓间充质干细胞成骨分化减弱，下调－ｍｉｃｒｏＲＮＡ２３ａ能够促进ＢＭＳＣ成骨分化。利用生物

5、信息学分析结合双英光素酶报－ｒｅ告基因系统预测低密度脂蛋白相关蛋白５（ｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒｌａｔｅｄ防－－２３ａＡｔｅｉｎ５ＬＲＰ５ｍｉＲＮＡｓｈＲＮ５ｐ，）为的视基因，使用沉默ＬＲＰ基因后可观察－２３ａ到ＢＭＳＣ成骨分化减弱，与上调ｍｉＲＮＡ类似。激素性股骨头坏死坏死目前仍没有特效药物，研巧发现，间断小剂量应用甲状。旁腺激素能够促进成骨细胞生成，促进干细胞向成骨方向分化人重组甲状旁腺激一－）素［ｒｈＰＴＨ（１３４］是目前唯

6、批准上市的具有促进骨合成的抗骨质疏松药物，除治疗骨质疏松外，在促进骨折愈合、促进脊柱融合、促进软骨修复及下领骨坏死都显示出了良好治疗效果。激素性股骨头坏死的发病机制包括激素抑制干细胞成骨分化比？了（－，我们推测，人重沮甲状旁腺激素１１１３４）是否也可；通过促进成［］（＾骨细胞生成，促进干细胞向成骨方向分化的作用来治疗股骨头坏死。研究目的：ｍｃｒｏ－ｉｃｓ１．构建ｉＲＮＡ２３ａｍｉｍ和ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ转染大鼠骨髓间充质干细胞。将转染，成功的大鼠骨髓间充质干细胞注射至大

7、鼠激素性股骨头坏死模型体内。评价ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ２３ａ调控ＢＭＳＣ对大鼠股骨头坏死的修复作用。一２．研巧目前唯的骨合成类抗骨质疏松药物特立帕肤对大鼠股骨头坏死的治疗作用。研究方法：一１．第部分：全骨髓贴壁培养法分离并培养大鼠骨髓间充质干细胞并进行鉴定。－２３ａｍｂ采用慢病毒法携带ｍｉｃｒｏＲＮＡｉｍｉｃｓ，ｉｎｈｉｉｔｏｒｖｅｃｔｏｒ转染大鼠骨髓间充质干细，胞。使用脂多糖（ＬＰＳ，２０ｉ／Ｋｘ２）联合大剂量甲强龙（４０ｍ／Ｋｘ３）的方法建立ｆｇｇｇｇ３中国医学

8、科学院北京协和医学院博±研巧生学位论文Ａ－２３ａｒ大鼠激素性股骨头坏死动物模型。将ｍｉＲＮｍｉｍｉｃｓ，ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｖｅｃｔｏ转染成功后的ＢＭＳＣ通过大鼠股骨髓腔注射的方法将干细胞悬液移植到大鼠激素性股骨头坏。ｍｉｃｒｏＣＴ扫描死模型体内处死大鼠取大鼠股骨头行及病理切片，观察股骨头坏死情况－５Ｐ５表达。免疫组化检测ＬＲＰ在各组表达情况，观察股骨头坏死发生率和ＬＲ的差异。２．第二部分：首先应用脂多糖（ＬＰＳ，２０帖／Ｋｇ。）联合