microrna-155通过下调erk12水平影响人正常椎间盘髓核细胞退变的实验研究

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1、暨南大学博士学位论文题名（中英对照）：microRNA-155通过下调ERK1/2水平影响人正常椎间盘髓核细胞退变的实验研究MicroRNA-155inhibitthedegenerationofnucleuspulposuscellsthroughtargetingERK1/2作者姓名：叶冬平指导教师姓名及学位、职称：梁伟国主任医师、副教授、硕士学位学科、专业名称：外科学、骨科论文提交日期：论文答辩日期：2015.12.02答辩委员会主席：廖威明教授论文评阅人：学位授予单位和日期：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以

2、标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得暨南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解暨南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权暨南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名

3、：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编：暨南大学博士学位论文目录中文摘要………………………………………………………………I英文摘要………………………………………………………………II目录…………………………………………………………………...III绪论………………………………………………………………........1第一部分pGFP/hTERT/Neo转染正常人椎间盘髓核细胞构建稳定细胞株的实验研究……………………………………………………….81.材料与方法…………………………………………………………..92.实验结果…………………

4、……………………………………….....203.讨论………………………………………………………………….214.结论………………………………………………………………….24附图……………………………………………………………………25第二部分microRNA-155通过调节ERK1/2水平抑制椎间盘髓核细胞退变的实验研究……………………………………………….......361.实验材料与方法…………………………………………………....362.实验结果…………………………………………………………....443.讨论…………………………………………………………………444.结论…………

5、………………………………………………………47附图…………………………………………………………………...49全文小结……………………………………………………………...56综述………………………………………………………………….59参考文献……………………………………………………………...67Ⅲ暨南大学博士学位论文缩略词………………………………………………………………...72攻读学位期间发表论文……………………………………………...73致谢…………………………………………………………………...74Ⅲ暨南大学博士学位论文摘要第一部分：pGFP/hTERT/Neo转染正常人椎

6、间盘髓核细胞构建稳定细胞目的：探讨hTERT（人端粒酶逆转录酶基因）重组绿色荧光表达载体的构建及其转染正常髓核细胞构建永生化细胞的可行性，为进一步探讨人椎间盘髓核细胞退变机制的实验研究提供标准细胞株。方法：通过目的基因克隆、真核表达质粒中目的基因序列测定、目的基因真核表达质粒的构建、转染hTERT表达检测等步骤进行实验。XTT方法检测正常髓核细胞与转染hTERT髓核细胞生长曲线，RT-PCR检测两种细胞Ⅱ型胶原、糖胺多糖、BMP-2、IGF-1、TGF-β、BMP-4、COLLAGENI、PDGF、FGF基因表达量，ELISA方法检测两种细胞外液Ⅱ型胶原、糖胺多糖表达量，无血清培养

7、基状态下细胞周期分析检测细胞凋亡，裸小鼠种植实验检测永生化髓核细胞的致瘤性实验并进行病理分析。结果：转染hTERT后NP细胞增殖加速，传了20代细胞仍未见老化，细胞内Ⅱ型胶原、糖胺多糖基因表达与正常髓核细胞第1代类似，细胞外液Ⅱ型胶原、糖胺多糖与正常髓核细胞第1代类似。而未转染hTERT的NP细胞传4～5代增值基本停滞了。细胞免疫化学染色（免疫荧光）：刚转染hTERT不久，髓核细胞外基质染色以Ⅱ型胶原为主，传20代之后，仍未见Ⅰ型胶原表达，而正常髓核细胞传4代以后Ⅰ型