mcp-1pi3kakt信号通路参与骨癌痛调控及机制

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目MCP-l/P〗3K/Akt信号通路参与骨癌痛调控及机制研究生姓名金迪指导教师姓名杨建平王丽娜专业名称麻醉学研究方向痛觉信息的传递与调控论文提交日期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。苏州大学学位论文使用授权声明本人完

2、全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社）、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在_____年_月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：今地日期：丨以MCP-1/PI3K/Akt信号通路参与骨癌痛调控及机制中文摘要

3、MCP-1/PI3K/Akt信号通路参与骨癌痛调控及机制中文摘要第一部分：MCP-1通过PI3K/Akt信号通路活化体外大鼠小胶质细胞目的观察MCP-1在体外通过细胞内PI3K/Akt信号通路对大鼠小胶质细胞的激活作用。方法将体外培养的大鼠小胶质细胞分为六组：空白对照组（I组）、MCP-11min组（II组）、MCP-110min组（III组）、MCP-120min组（IV组）、MCP-130min组（V组）、MCP-1+LY294002组（VI组）。收集细胞，通过免疫组化（n=4）、免疫荧光（n=4）、Westernblots（n=4）的方法检测每组细胞p-Akt和OX-42的表

4、达变化。结果免疫组化结果显示：与其他组比较，II、III组小胶质细胞p-Akt的MOD值显著增加(P<0.01)；II组p-Akt的MOD值与III组差异无统计学意义(P>0.05)；I、IV、V、VI各组之间p-Akt表达无统计学差异(P>0.05)。免疫荧光和WesternBlots结果显示：与I组相比，III组小胶质细胞p-Akt和OX-42表达显著增加(P<0.05)；VI组与III组相比p-Akt和OX-42表达显著降低(P<0.05)。结论MCP-1可能通过激活PI3K/Akt信号通路活化体外大鼠小胶质细胞。第二部分：MCP-1激活骨癌痛大鼠脊髓背角PI3K/Akt信号

5、通路目的观测在骨癌痛大鼠模型鞘内注射MCP-1中和抗体后，其痛阈的改变以及脊髓背角p-Akt表达的变化。方法SPF级雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只，体重190~210g，随机分为5组（n=8）：假手术组（I组），于大鼠左侧骨干骺端骨髓腔内注射10μlPBS液；假手术+MCP-1中和抗体组（II组），在注射PBS液后7~9d鞘内注射MCP-1中和抗体(1μg/μl)10μl，每天1次；骨癌痛组（III组），于大鼠左后肢胫骨干骺端骨髓腔内注7射乳腺癌细胞Walker25610μl(2×10/ml)构建胫骨癌痛模型；骨癌痛+对照IgG组(IVI中文摘要MCP-1/PI

6、3K/Akt信号通路参与骨癌痛调控及机制组)，在注射肿瘤细胞后7~9d鞘内注射对照IgG(1g/L)10μl，每天1次；骨癌痛+MCP-1中和抗体组（V组），在注射Walker256细胞后7~9d鞘内注射MCP-1中和抗体(1g/L)10μl，每天1次。观测术前1d，术后1、3、5、7、8、9d各组大鼠机械痛阈。术后9d给药测痛后处死大鼠，取各组大鼠的L4-6脊髓组织进行免疫荧光染色和WesternBlots，检测脊髓背角p-Akt的表达。结果与I组相比，骨癌痛（III、IV组）大鼠机械痛阈明显下降(P<0.01)，脊髓背角p-Akt阳性细胞数显著增加，蛋白表达上调(P<0.01)

7、，而II组上述指标无明显差别(P>0.05)。与III组或IV组比较，V组鞘内注射MCP-1中和抗体后能明显提高骨癌痛大鼠的机械痛觉阈值(P<0.01)，降低脊髓背角p-Akt的表达(P<0.01)。结论MCP-1可能通过激活脊髓背角PI3K/Akt信号通路参与大鼠骨癌痛的发生。第三部分：鞘内注射LY294002缓解大鼠骨癌痛目的观察鞘内注射PI3K抑制剂LY294002后，骨癌痛大鼠在疼痛行为学和脊髓背角小胶质细胞的表达及活化方面的改变。方法SPF级雌性Spragu