脊髓mcp-1调控fractalkine分泌致大鼠骨癌痛的神经免疫机制

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1、博士学位论文论文题目脊髓MCP-1调控Fractalkine分泌致大鼠骨癌痛的神经免疫机制研究生姓名胡计嬅指导教师姓名杨建平（教授）专业名称麻醉学研究方向疼痛及其脊髓机理论文提交日期2013年3月脊髓MCP-1调控Fractalkine分泌致大鼠骨癌痛的神经免疫机制中文摘要脊髓MCP-1调控Fractalkine分泌致大鼠骨癌痛的神经免疫机制中文摘要本室研究证实：骨癌痛大鼠脊髓神经元分泌趋化因子Fractalkine（FKN）作用于小胶质细胞上的CX3CR1，使其激活致痛敏。最新研究表明：在神经病理性痛状态下，趋化因子MCP-1（Monocytechemoattractantprotein-

2、1，CCL2，单核细胞趋化蛋白-1）及其受体CCR2介导神经元和胶质细胞间的对话；并可调节外周血单核细胞Fractalkine/CX3CR1的表达和功能；但在骨癌痛（与神经病理性痛性质相似而又有其特征）中无类似报道。据此推测：脊髓MCP-1/CCR2激活小胶质细胞调控Fractalkine/CX3CR1间的信息传递，参与骨癌痛敏的发生和维持。本研究采用行为学、RT-PCR、Western-Blot、ELISA、免疫组化等方法，在分子（CCR2、CX3CR1受体）、细胞（小胶质细胞和神经元）和整体（免疫和感觉系统）水平探讨骨癌痛的神经免疫机制。为开发以神经-免疫-炎症网络为靶点的癌痛治疗药物提

3、供新思路。[关键词]MCP-1/CCR2；Fractalkine/CX3CR1；骨癌痛；神经；免疫第一部分趋化因子MCP-1/CCR2信号系统在大鼠骨癌痛中的作用及机制目的探讨单核细胞趋化蛋白-1（Monocytechemoattractantprotein-1，MCP-1/CCL2）及其受体CCR2信号系统在大鼠骨癌痛中的作用及机制。方法采用Walker256乳腺癌细胞，注射在胫骨上端建立骨癌痛模型。雌性SD大鼠，根据研究目的进行相应的实验分组，并通过疼痛行为学（n=12）、Real-timePCR（n=4）、Western-Blot（n=4）、免疫组织化学（n=4）和ELISA（n=4）

4、方法进行以下研究：1、观察骨癌痛大鼠脊髓MCP-1及其受体CCR2表达变化及分布；2、观察鞘内注射MCP-1中和抗体对骨癌痛大鼠疼痛行为学影响及脊髓CCR2、OX-42（小胶质细胞激活标志物）和细胞因子（IL-1β、TNF-α）表达变化。3、观察鞘内注射外源性MCP-1对正常I中文摘要脊髓MCP-1调控Fractalkine分泌致大鼠骨癌痛的神经免疫机制大鼠机械痛阈的影响。结果骨癌痛大鼠L4～6脊髓背角MCP-1和其受体CCR2的mRNA及蛋白表达均显著增加（P<0.01），CCR2表达在脊髓背角小胶质细胞和神经元。2、建模后4～6d连续鞘内注射MCP-1中和抗体抑制骨癌痛的产生（P<0.0

5、1）；并减少了骨癌痛大鼠脊髓背角CCR2、OX-42及IL-1β、TNF-α细胞因子的表达（P<0.01）。建模后10～12d连续给予MCP-1中和抗体部分逆转了骨癌痛大鼠机械性痛觉过敏（P<0.01）。3、正常大鼠鞘内给予外源性MCP-1剂量依赖性的导致机械性痛觉过敏（P<0.01）。结论MCP-1/CCR2信号系统可能通过神经元-胶质细胞之间的对话介导了骨癌痛的产生和维持。[关键词]MCP-1/CCR2；骨癌痛；脊髓；小胶质细胞；大鼠第二部分MCP-1通过激活小胶质细胞CathepsinS参与大鼠骨癌痛的发生目的探讨MCP-1是否通过激活小胶质细胞溶酶体半胱氨酸蛋白酶S（Cathepsi

6、nS,CatS）参与大鼠骨癌痛的发生。方法采用雌性SD大鼠，建立胫骨癌痛模型，按照研究目的进行相应的实验分组，并通过疼痛行为学（n=8）、Western-Blot（n=4）和免疫组织化学（n=4）方法进行以下研究：1、观察骨癌痛大鼠脊髓CatS表达变化及分布；2、观察鞘内注射MCP-1中和抗体对骨癌痛大鼠脊髓CatS表达的影响；3、观察鞘内注射MCP-1后正常大鼠脊髓CatS表达的变化。结果骨癌痛大鼠脊髓CatS蛋白表达显著增加（P<0.01），骨癌痛大鼠CatS表达在脊髓小胶质细胞。2、MCP-1中和抗体有效缓解大鼠骨癌痛并减少了小胶质细胞CatS的表达（P<0.01）。3、鞘内给予外源性

7、MCP-1可使脊髓小胶质CatS的表达增加（P<0.01）。结论MCP-1通过作用于脊髓小胶质细胞上CCR2受体激活小胶质细胞，小胶质细胞激活增加CatS的释放参与大鼠骨癌痛的维持。[关键词]CathepsinS；骨癌痛；脊髓；小胶质细胞；大鼠第三部分CathepsinS介导Fractalkine分泌参与大鼠骨癌痛目的探讨CathepsinS（CatS）是否通过介导Fractalkine（FKN）分泌参与大鼠