il-17(a)对卵巢癌网膜转移与耐药性的影响及其机制的研究

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1、分类号：R392学校代码：10062密级：学号：2012601004博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：IL-17(A)对卵巢癌网膜转移与耐药性的影响及其机制的研究TITLEStudyonIL-17(A)inRegulatingOmentumMetastasisandDrugResistanceofOvarianCancer一级学科：基础医学二级学科：免疫学论文作者：牛秀珑指导教师：邓为民教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R392学校代码：10062密级：学号：2012601004学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学博士学位

2、论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：IL-17(A)对卵巢癌网膜转移与耐药性的影响及其机制的研究TITLEStudyonIL-17(A)inRegulatingOmentumMetastasisandDrugResistanceofOvarianCancer一级学科：基础医学二级学科：免疫学论文作者：牛秀珑指导教师：邓为民教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外,论文中不一包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究

3、成果,与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位咖签名:尘仁纭瞄日期:″压辞/局勿日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文,并编入有关数据库。保密匚彐,在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密E口〈“”(请在相对应的方框内打√)学位论文作者签名:主L塾2鱼土日期:刃∫轹犭月″日导师签名:日期:冫`‘年犭月∫口日天津医科大学博士学位

4、论文中文摘要目的：探讨白细胞介素-17A（Interleukin-17A，IL-17A，也称作IL-17）对卵巢癌生长、网膜转移及化疗敏感性的影响及其作用机制。方法：1.应用WesternBlot技术检测人卵巢癌细胞系A2780、OVCAR3、SKOV3、HO8910和HO8910/PM中IL-17RA的蛋白表达水平，为后续研究提供实验依据。2.应用MTT技术检测不同浓度外源性rhIL-17A对五种人卵巢癌细胞系和小鼠上皮性卵巢癌细胞系ID8增殖水平的影响，应用实时荧光定量PCR和WesternBlot技术分析癌干细胞标记分子的mRNA和蛋白表达水平。3.应用细胞划痕实

5、验检测外源性rmIL-17A对小鼠卵巢癌细胞系ID8迁移活性的影响。应用8.0μmTranswell小室侵袭实验检测外源性rmIL-17A和/或小鼠原代网膜脂肪细胞对ID8细胞侵袭能力的影响。应用3.0μmTranswell小室进行ID8与小鼠原代网膜脂肪细胞共同培养，应用WesternBlot技术分析外源性rmIL-17A和/或网膜脂肪细胞对ID8细胞MMP-2和FABP4的蛋白表达水平的影响。应用实时荧光定量PCR和Westernblot技术检测外源性IL-17A对相关信号分子STAT3和NF-κB的表达水平及磷酸化水平的影响。-/-4.利用C57BL/6遗传背景的

6、野生型（WT）和IL-17小鼠，建立小鼠腹腔种植瘤和卵巢原位种植瘤两种卵巢癌动物模型，观察内源性IL-17对腹腔内成瘤、原位成瘤和转移的影响，应用免疫组化技术观察瘤组织中IL-17A、MMP-2和FABP4的表达。5.收集不同FIGO分期的卵巢癌临床标本，分析IL-17A、MMP2、FABP4表达与肿瘤临床进展、转移、预后的相关性。6.应用MTT技术检测人卵巢癌细胞系A2780、OVCAR3和SKOV3对顺铂（DDP）的敏感性，分析外源性rhIL-17A对其顺铂敏感性的影响。选择顺铂敏感细胞系A2780和顺铂耐药细胞系OVCAR3为研究对象，应用流式细胞术分析外源性rh

7、IL-17A对细胞经顺铂作用后细胞凋亡水平和细胞周期分布的变化。7.应用实时荧光定量RT-PCR技术检测耐药相关基因ABCG2和TUBB3的mRNA表达水平，应用WesternBlot技术检测ABCG2的蛋白表达水平。-/-8.利用C57BL/6遗传背景的WT和IL-17小鼠，建立小鼠腹腔种植瘤卵巢癌I天津医科大学博士学位论文动物模型，观察内源性IL-17对DDP治疗敏感性的影响。9.收集原发性和复发性上皮性卵巢癌临床病理标本，应用免疫组化技术分析IL-17A和ABCG2与卵巢癌临床分期、预后的相关性。结果：1.人卵巢癌细胞系可组成性表达