fut6在tgf-β_1诱导的肾小管上皮—间充质转化中的作用研究

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1、分类号：R363.2+5学校代码：10062密级：学号：2012602086硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：FUT6在TGF-β1诱导的肾小管上皮-间充质转化中的作用研究TITLETheroleofFUT6inTGF-β1inducedepithelial-mesenchymaltransitionofrenaltubularepithelialcells一级学科：基础医学二级学科：病理学与病理生理学论文作者：王玉华指导教师：李卫东教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R363.2+5学校代码：10062密级：学号：2012602086学位类别：科

2、学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：FUT6在TGF-β1诱导的肾小管上皮-间充质转化中的作用研究TITLETheroleofFUT6inTGF-β1inducedepithelial-mesenchymaltransitionofrenaltubularepithelialcells一级学科：基础医学二级学科：病理学与病理生理学论文作者：王玉华指导教师：李卫东教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢

3、的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论

4、文中文摘要目的：研究α-1,3岩藻糖基转移酶（α-1,3fucosyltransferase，FUT6）对TGF-β1诱导的人肾皮质近曲肾小管上皮细胞（Humankidney-2,HK-2）在上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymaltransition,EMT）过程中的作用，探讨2型糖尿病肾病(DiabeticNephropathy,DN)患者早期TGF-β/Smad信号通路激活的可能分子机制，为寻找与DN相关的致病基因、了解DN的遗传背景提供依据。方法：（1）选取早期出现TGF-β/Smad信号通路高表达的2型糖尿病肾病患者作为研究对象，提取患者外周血全基因组D

5、NA，纯化后华大基因IlluminaHiSeq2000高通量测序平台测序。（2）分析处理外显子测序信息，对所得变异进行注释，并与公共数据库YH、dbSNP129、8HapMapexome和thousandsgenome进行比对过滤，筛除已报道的基因多态性位点。对发生无义突变基因的功能及在肾脏的表达情况进行生物信息学分析。（3）根据患病基因的突变频数、检测SNP位点的质量值、是否在肾脏表达及基因功能分析，选取FUT6作为研究对象。对该DN患者的活检肾组织进行SP(过氧化物酶标记的链霉卵白素)法免疫组织化学染色，了解目的基因FUT6的表达情况。（4）用荧光标记的siRNA（Cy3-siRN

6、A）瞬时转染HK-2细胞，倒置显微镜检测转染效率，Westernblot检测FUT6基因的沉默效率。（5）为研究FUT6-siRNA干扰对EMT的影响，实验分为以下几组：①正常对照组（NC组），常规培养细胞；②TGF-β1刺激组（TGF组），TGF-β110ng/ml刺激细胞48小时；③FUT6-siRNA干扰组（RNAi组），使用FUT6-siRNA50nM瞬时转染细胞，沉默HK-2细胞FUT6的表达；④FUT6-siRNA干扰+TGF-β1刺激组（iTGF组），使用FUT6-siRNA50nM瞬时转染细胞沉默FUT6基因表达，随后加入TGF-β110ng/ml刺激细胞48小时。相差

7、显微镜观察细胞形态学变化；Westernblot检测FUT6蛋白的表达情况，及各组TGF-β/Smad信号系统（TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad2/3和p-Smad2/3）的表达；Westernblot检测EMT相关指标（E-cadherin、N-cadherin、Snail和Vemintin）的表达；另外用免疫沉淀（Immunoprecipitation,IP）结合凝集素印迹（Lectinblottinganalysis,IB）特异性