PAK4在TGF-β1诱导人肾小管细胞上皮—间质转分化中的机制研究

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1、分类号：R725单位代码：10159密级：公开学号：201110095博士学位论文中文题目：PAK4在TGF-β1诱导人肾小管细胞上皮－间质转分化中的机制研究英文题目：StudyontheroleandmechanismofPAK4inTGF-β-inducedEMTinrenaltubularepithelialcells论文作者：范妍指导教师：姜红教授学科专业：儿科学完成时间：2018年10月中国医科大学博士学位论文PAK4在TGF-β1诱导人肾小管细胞上皮－间质转分化中的机制研究StudyontheroleandmechanismofPAK4inTGF-β-in

2、ducedEMTinrenaltubularepithelialcells论文作者范妍指导教师姜红教授申请学位医学博士培养单位第一临床学院一级学科临床医学二级学科儿科学研究方向小儿肾脏及风湿免疫疾病论文起止时间2014年2月—2018年10月论文完成时间2018年10月中国医科大学（辽宁）2018年10月中国医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：本论文是我个人在导师指导下独立进行的研宄工，作及取得的研究成果，论文中除加以标注的内容外不包含其他人或机构己经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本研宄提供贡献的其他个人和集体

3、均己在文中进行了明确的说明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：ｙ日期：年ｆ月日中国医科大学学位论文版权使用授权书、使用学位论文的规定本学位论文作者完全了解学校有关保留，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、复印件。本人授权中国医科大学可以和电子版，允许学位论文被查阅和借阅将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密（）。（保密：请在括号，在年后解密适用本授权书＿“”内划Ｖ）论文作者签名指导教师签名：

4、曰期：丄月Ｌ日日期：／朗之日咕年丨多年中国医科大学博士学位论文摘要目的：慢性肾脏病（chronickidneydisease，CKD）是一个不可逆的疾病进展过程，最终发展为肾衰竭，进入终末期肾病（end-stagerenaldisease，ESRD）。CKD在儿童肾脏疾病中占大约1.2%，在肾脏疾病致死的患儿中，CKD致死率为9%。儿童一旦进入ESRD，会对其生长发育、心理健康等产生很大影响，生存质量降低，且ESRD死亡率极高。肾小管细胞的上皮-间质转分化（epithelial-mesenchymaltransition，EMT）在CKD肾纤维化的发生发展中

5、起到了极为重要的作用。在众多EMT的调节机制中，转化生长因子beta(Transforminggrowthfactorbeta，TGF-β)信号途径被认为是最主要的调节机制，而作为最主要的促纤维化因子，TGF-β在肾小管上皮细胞以及肾小球足细胞的EMT中扮演了非常重要的角色。P21活化蛋白激酶（p21-activatedkinase，PAK）是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，进化保守，是Rho家族小鸟苷三磷酸酶(Rho-GTPase)Cdc42和Rac下游重要的靶蛋白。生长因子以及其细胞外信号能够通过GTP酶和非GTP酶依赖的信号通路致PAKs活化，从而使PAKs参与细胞

6、骨架、细胞生存、细胞有丝分裂和血管生成等生物学功能。目前研究发现，PAKs家族共有6个成员，根据它们的结构特点以及相似性，分为两大类，I类包括PAK1、PAK2和PAK3，II类包括PAK4、PAK5和PAK6。PAK4是II类PAKs中最早被报道的成员，大多数组织中都有表达，在前列腺、睾丸和结肠中表达水平较高。有研究显示PAK4与肿瘤的EMT相关。本研究应用TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞发生EMT时，探讨PAK4在肾小管细胞上皮－间质转分化中表达的变化以及PAK4在TGF-β1诱导的肾小管细胞上皮－间质转分化中的作用及其机制方法：常规培养人肾小管上皮细胞(HK-2

7、细胞)，设定浓度梯度：分别给予0、l、2、5及10ng/ml的TGF-β1刺激HK-2细胞48小时；设定时间梯度：均给予5ng/ml的TGF-β1刺激HK-2细胞0、12、24、48及72小时，在相差显微镜下观察不同浓度及时间刺激对细胞形态的影响；应用Westernblot、RT-PCR及免疫荧光方法检测各组细胞的PAK4、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、纤粘连蛋白(Fibronectin)及波形蛋白（Vimentin）的蛋白表达水平及mRNA表达水平；应用Transwell小室法检测不同浓度及时间刺激对HK-2细胞迁移能力的影响。根据基因序列