资源描述：
《egcg在草鱼体内的代谢及其对致病菌抑菌功效》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、10364I摘要表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）是从茶叶中分离得到的儿茶素类单体，是茶多酚生物活性的主要成份。本实验以草鱼为实验对象，探索以浓度为75mg/kg的EGCG灌胃草鱼后，在不同时间点分析鱼血浆及组织样品中儿茶素的代谢规律。此外，我们还比较了四种儿茶素：表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素（EGC）、表儿茶素（EC）体外抑制草鱼致病菌嗜水气单胞菌、铜绿假单胞菌和柠檬酸杆菌的功效研究。结论如下：（1）建立了草鱼血浆和组织样品的前处理方法。分别准确吸取0.6mL血浆、2mL肝匀浆液于
2、10mL具塞离心管中,均加入为40μL的20%的Vc以及200μL的0.05%Na2-EDTA溶液，混匀后,再准确加入乙酸乙酯4mL,振荡5min,6000r/min高速离心5min,取出全部上层有机相;再加入2mL乙酸乙酯重复萃取一次,合并两次萃取的有机相于尖底玻璃离心管中,45℃水浴中弱氮气流吹干,向血浆样品中加入500uL10%的乙腈-水溶液,振荡溶解,18000r/min高速离心5min后,吸取上清液20μL进样分析。肝脏组织萃取液挥干后用500uL的10%乙腈-水溶解,然后再加入0.5mL正己烷去脂,振荡后,18000r/min
3、高速离心5min后,弃去全部正己烷层,0.5mL正己烷重复去脂一次,高速离心后取下层20μL进样分析。（2）运用HPLC检测分析血液、肝脏中的EGCG的含量，根据标准曲线进行含量测定，作出EGCG在血清、肝脏中吸收代谢的浓度-时间曲线图。灌胃之后，分别于15min、30min、45min、60min、120min和300min六个时间点收集鱼血液样品。经与EGCG标品、空白样品对照，灌胃后15-300min血清中均能检测到EGCG原型，且15-45min时间范围内，随着时间推移，血浆中EGCG的浓度不断上升，45min时达到最大浓度。达峰
4、时间Tmax为45min，最大浓度Cmax为512.8068ug/mL，在此浓度下，计算得到的相对生物利用度为5.57%，60-300min随之缓慢下降。（3）同样，15-300min时间范围内的肝脏样品中也均能检测到EGCG原型，在15-60min时间范围内，随着时间推移，EGCG浓度不断增加，灌胃后60minEGCG达到最大浓度Cmax434.1476ug/mL，达峰时间Tmax为60min。（4）运用UPLC-ESI-Orbitrap-MS/MS对样品组织进行分析检测，结果表明，15-300min时间范围内在血清、肝脏和肠道组织样品
5、中均能检测到EGCG原型，在时间点为30min的肝脏样品中检测到ECG的存在，60-300min时间范围在血清、肝脏和肠道组织样品中均检测到EGCG代谢产物ECG的存在。（5）通过一系列递增浓度的儿茶素溶液对四种菌液的抑菌试验研究可知，四种儿茶素对四种菌大肠杆菌44102、柠檬酸杆菌、铜绿假单胞菌和嗜水气单胞菌均有不同程度的抑菌效果，低浓度的药液（0.05-0.4mM）的抑制作用属于低敏；中浓度的药液II（0.4-2.0mM）的抑制作用属于中敏；高浓度的药液（2.0-10mM）的抑制作用属于高敏。0.05mM为MIC（最低抑菌浓度），当药
6、液浓度由0.2mM增加到4.0mM时，抑菌圈的增幅较大，抑菌效果增强的幅度较为明显；当药液浓度由4.0mM增加到10.0mM时，抑菌圈增幅较小，抑菌效果增强的幅度较小，抑菌效果逐渐达到上限。总体来看，随着药液浓度的增加，抑菌圈直径呈增长趋势，即抑菌强度随药液浓度增加而增加。同一浓度的药液对不同菌的抑制作用不同。EGCG对三种强致病菌嗜水气单胞菌、柠檬酸杆菌和铜绿假单胞菌抑菌效果强于非致病菌大肠杆菌44102，其中，柠檬酸杆菌被抑菌效果最强。并且，EGCG的抑菌效果强于其余三种儿茶素，EGCG＞EGC＞ECG＞EC。关键词：草鱼，EGCG，
7、HPLC，LC-Orbitrap-MS，吸收代谢，儿茶素，抑菌IIIAbstractEGCGisisolatedfromtheteacatechinsmonomers,isteapolyphenolsbioactiveingredient.Thisexperimentistograsscarpasexperimentalobject,exploreaconcentrationof75mg/kgofEGCGlavageaftergrasscarp,fishplasmaandtissuesamplesatdifferenttimepoints
8、analysis,metabolicrulesofcatechinsintheinaddition,wealsocomparethefourtypesofcatechin:EGCG,ECG,E
