ecm蛋白srpx2对结肠癌sw480细胞生物学行为的影响

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1、分类号；Ｒ５７４．６密级：公开Ｗ｜｜臭，＾Ｉ專省為心其■＇＇＇ｆ－．研ｋ究生学位论文ＥＣＭ蛋白ＳＲＰＸ２对结肠癌ＳＷ４８０细胞生物论文题目（中文）学行为的影响ＥｆｆｅｃｔｏｆＥＣＭｐｒｏｔｅｉｎＳＲＰＸ２ｏｎ化０ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ论文题目（外文）ｂｅｈａｖｉｏｒｏｆｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＳＷ４８０研究生姓名周跃学科？、专业内科学消化內科研巧方向消化道肿瘤学位级别硕古．导师姓名、职称吴静教授论文工作起止年月２０１３年１０月至２０巧年３月

2、论文提交日期２０１５年４月论文答辩日期２０巧年５月；；巧学位授予日期２０巧年６月Ｉ，叩；５；＂＇－１校址：甘肃省兰州市／ＺＡ／７％＇－诚途原创性声明，本人郑重声明：本人所呈交的学位论文是在导师的指导下独立进行研巧所取得的成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等，均己明碗注明出处。除文中己经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研巧成果做出重要贡献的个人和集体，均己在文中Ｗ明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：／日

3、期；关于学位论文使用授权的声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属兰州大、学。本人完全了解兰州大学有关保存使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部口或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权兰州大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用任何复制手段保存和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时一，第署名单位仍然为兰州大学。本学位论文研巧内容：公开□不宜公开，已在学位办公室办理保密申请，解密后适用本授权书。＂＂一Ｖ（

4、请在Ｗ上选项内选择其中项打）论文作者签名：导师签名：名争爭￣日期：ｈＭ日期；ｎｖ．１１ＥＣＭ蛋白ＳＲＰＸ２对结肠癌ＳＷ４８０细胞生物学行为的影响中文摘要目的检测细胞外基质（ＥＣＭ）ＳＲＰＸ２蛋白在结肠癌组织中的表达，观察过表达ＳＲＰＸ２对结肠癌ＳＷ４８０细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法采用免疫组化（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ二步法）在结肠癌组织巧片中检测ＳＲＰＸ２。Ｏｎｃｏｍｉｎｅ数据库分析ＨＣｍ６、ＨＴ２９、ＳＷ４８０的表达根据后，选择结肠癌细胞株，采用实时炎光定量ＰＣ民技术，筛选出相对高表达ＳＲＰＸ２ｍＲＮＡ的ＨＣＴ１１６

5、ＲＮＡ－，ＲＴＰＣＲＣＤＤＮＡＰＣＲ细胞；提取总扩増该基因Ｓ区的ｃ片既将产物经ＤＮＡ测序进行鉴定正确后，通过基因重组技术将该测序正确的目的ｃＤＮＡ片段ＤＮＡ＋－与真核表达载体ＰＣ３．１（）连接，构建ＰＣＤＮＡ３．１ＳＲＰＸ２重组真核表达质粒，经双酶切电泳分析鉴定；Ｗ脂质体介导瞬时转染相对低表达ＳＲＰＸ２基因的结肠ＳＷ４８０ＰＣＲ癌细胞株，采用实时巧光定量及蛋白免疫印迹技术鉴定ＳＲＰＸ２ｍＲＮＡ及蛋白的表达：通过细胞增殖实验ＭＴＴ法，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ细胞侵袭、迁移实髓检测转染ＣＤＮＡ３－Ｐ．１ＳＲＰＸ２重组真核表达质粒后对结肠癌细胞的增殖、侵

6、袭及迂移的影响。结果免疫组织化学检测结果示ＳＲＰＸ２在结肠癌中表达较癌旁组织明显増强（ｐＯ．Ｏｌ）；实时焚光定量ＰＣ民及＼＾６５１６１１１６１〇巧会证了８炒乂２１１１财＾八和蛋白在结－肠癌的表达水平，ＨＣＴ１１６９次之、ＳＷ４８０最低ＲＴＰＣＲ成最高、Ｈ２；通过功克隆了ＳＲＰＸ２的ｃＤＮＡ片段，经酶切电泳及ＤＮＡ测序验证，插入的序列与ＧｅｎＢａｎｋ（ＮＭ０１４４６７）上的ＳＲＰＸ２基因ｍＲＮＡ序列完全相符，将目的ｃＤＮＡ片段与载ｃＤＮＡ３Ｊ－ＳＲＰＸ２体ＤＮＡ片段酶切连接后成功构建重组表达质粒ｐ，双酶切鉴定符ｉｔｉ）ＳＷ４８０细胞合预期

7、，Ｗ脂质体（Ｌｏｆｅｃａｍｎｅ２０００为介导瞬时转染ｐ，实时巧光ｅｓ－定量ＰＣ民和Ｗｔｅｍｂｌｏｔ检测结果示重姐表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１ＳＲＰＸ２瞬时转染细胞株中ＳＲＰＸ２ｍＲＮＡ水平和蛋白水平的表达明显高于空载体及未转染沮细胞＜０－（；７＜０．０１、；７．０５），ＰＣＤＮＡ３．１ＳＲＰＸ２在结肠癌细胞中可正确表达。ＭＴＴ（喔挫藍）细胞增殖实验，结果显示；４化及７２ｈ转染重组质粒組细胞的增殖水平明显＜００５）－増高（，ＴｒａｎｓｗｅｌＣＤＮＡ３Ｓ，．懊验检测结果衷明转染重组质拉Ｐ．１ＲＰＸ２组细胞的侵袭、迁移