dec2和hif-1α在骨肉瘤转移侵袭中的作用及分子机制

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1、上海交通大学硕士学位论文DEC2和HIF-1α在骨肉瘤转移侵袭中的作用及分子机制FunctionandMolecularMechanismofDEC2andHIF-1αintheInvasionandMetastasisofHumanOsteosarcoma作者姓名：胡涂指导老师：杨庆诚学科专业：外科学（骨科）研究方向：骨肉瘤转移侵袭机制的相关研究申请学位：硕士培养单位：上海市第六人民医院资助基金：国家自然基金[No.30973017]关键词：DEC2；HIF-1α；SHARP1；骨肉瘤；转移答辩日期：201

2、5年4月30日SHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITYMASTER’STHESISFunctionandMolecularMechanismofDEC2andHIF-1αintheInvasionandMetastasisofHumanOsteosarcomaAuthor:TuHuTutor:Prof.QingchengYangSpecialty:OrthopedicsDegree:MasterOrganization:ShanghaiJiaoTongUniversityAffiliatedSix

3、thPeople’sHospitalKeywords:DEC2,HIF-1α,SHARP1,osteosarcoma,MetastasisFund:NationalNaturalScienceFoundation(No.30973017)Date:April30th,2015上海交通大学硕士学位论文DEC2和HIF-1α在骨肉瘤转移侵袭中的作用及分子机制中文摘要骨肉瘤是最常见的骨源性恶性肿瘤。缺氧诱导因子1（hypoxia-induciblefactor1，HIF-1）的激活在实体肿瘤的代谢重构和进展中至关重

4、要，分化型胚胎软骨发育基因2（DifferentiatedEmbryonicChondrocyteGene2，DEC2）在最近的研究中发现可以抑制人乳腺癌和子宫内膜癌中的HIF-1表达。然而，HIF-1和DEC2在人骨肉瘤中的作用尚不明了。我们测定了骨肉瘤临床组织中HIF-1α和DEC2的表达及其与骨肉瘤预后的关系，进而研究DEC2和HIF-1α在骨肉瘤转移中的作用。研究中用到的实验方法包括临床组织标本的免疫组织化学技术，小干扰RNA（SmallinterferingRNA，siRNA）介导的基因沉默及其他分

5、子生物学技术。通过依靠重复的Trans-well体外培养体系，我们从骨肉瘤U2OS细胞系中筛选出转移侵袭能力更强的子代细胞系U2OS-M，并将其作为一个模型应用到DEC2和HIF-1α在骨肉瘤细胞转移中作用的研究。我们发现，在骨肉瘤临床组织中，DEC2的表达与HIF-1α水平呈正相关，而且HIF-1α的表达与骨肉瘤预后不佳密切相关。在骨肉瘤3个细胞U2OS、MNNG、143B中DEC2的表达沉默均导致HIF-1α表达量的下调，而且明显降低HIF-1α多个下游靶基因在缺氧应答中的表达增加。和转移能力较低的U2O

6、S原代细胞系相比，U2OS-M细胞系在mRNA水平和蛋白水平均表现出DEC2高表达状态。更正要的是，在U2OS-M细胞系中，我们发现DEC2的表达增加可以引起HIF-1α蛋白量在缺氧环境中更快速的增加。最后，我们发现HIF-1的激活亦可以反过来上调DEC2在骨肉瘤细胞中的表达。综上所述，尽管DEC2在其他肿瘤中可以促进HIF-1α的降解，我们的数据表明在骨肉瘤中DEC2加强了HIF-1α表达的稳定性，而且促进了HIF-1α的激活。另一上海交通大学硕士学位论文方面，HIF-1的激活也使得DEC2在骨肉瘤中的表达

7、增加。这些结果意味着DEC2可能通过增加肿瘤细胞对缺氧的敏感性使骨肉瘤进展加快并发生转移。该发现为骨肉瘤转移分子机制的研究提供了一个新的思路，也为骨肉瘤的治疗提供了新的作用靶点。关键词：DEC2；HIF-1α；SHARP1；骨肉瘤；转移上海交通大学硕士学位论文FunctionandMolecularMechanismofDEC2andHIF-1αintheInvasionandMetastasisofHumanOsteosarcomaABSTRACTOsteosarcomaisthemostcommonmal

8、ignanttumorofbone.HIF-1(hypoxia-induciblefactor1)activationiscriticalforthemetabolicreprogrammingandprogressionofsolidtumors,andDEC2(differentiatedembryonicchondrocytegene2)hasbeenrecentlyreportedtores