chi-mirna-4110对奶山羊smad2基因靶向调控作用的研究

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1、分类号：S814.8学校代码：10712UDC：636.3研究生学号：20丨3050568密级：公开灶农林對教大学2015届全日制硕士专业学位研究生学位论文chi-miRNA-4110对奶山羊Smad2基因靶向调控作用的研究类型农业推广硕士领域、方向养殖研究生雷颖楠导指教师曹斌云教授兀成时间2015.5中国陕西杨凌研究生学位论文的独创性声明本人声明：所呈交的全日制硕士专业学位论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究结果；论文中的研究数据及结果的获得完全符合学校《关于规范西北农林科技大学研究生学

2、术道德的暂行规定》，如果违反此规定，一切后杲与法律责任均由本人承担。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究结果，也不包含其他人和自己本人已获得西北农林科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文的致谢中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：2啪年（月2日导师指导研究生学位论文的承诺本人承诺:我的全日制硕士专业学位研究生t蘇、雄所呈交的硕士学位论文是在我指导下独立开展研究工作及取得的研究结果，属于我

3、现岗职务工作的结果，并严格按照学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》而获得的研究结果。如果违反学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》，我愿接受按学校有关规定的处罚处理并承担相应导师连带责任。导师签名:时间：>丨玉年《月1•日关于研究生学位论文使用授权的说明本学位论文的知识产权归属西北农林科技大学。本人同意西北农林科技大学保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；同意西北农林科技大学将本学位论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国优秀硕士学位论

4、文全文数据库》进行出版，并享受相关权益。本人保证，在毕业离开（或者工作调离）西北农林科技大学后，发表或者使用本学位论文及其相关的工作成果时，将以西北农林科技大学为第一署名单位，否则，愿意按《中华人民共和国著作权法》等有关规定接受处理并承担法律责任。任何收存和保管本论文各种版本的其他单位和个人(包括研究生本人)未经本论文作者的导师同意，不得有对本论文进行复制、修改、发行、出租、改编等侵犯著作权的行为，否则，按违背《中华人民共和国著作权法》等有关规定处理并追究法律责任。(保密的学位论文在保密期限内，不得以任何方

5、式发表、借阅、复印、缩印或扫描复制手段保存、汇编论文）研究生签名：雪棘拂时间：2。以年（月Z曰chi-miRNA-4110对奶山羊Smad2基因靶向调控作用的研究摘要MicroRNA（miRNA）是一类重要的非编码小RNA分子，在动物繁殖过程中发挥着重要的调控作用。miRNA通过调节靶基因的表达影响动物的繁殖机能。为进一步揭示miRNA对奶山羊生殖机能的调控作用，本研究在前期构建的多羔（3-5羔/胎）和单羔（1羔/胎）奶山羊发情期卵巢差异表达miRNA文库的基础上，以关中奶山羊为研究对象，利用Realtim

6、e-PCR检测chi-miR-4110在多羔和单羔奶山羊发情期卵巢中的差异表达水平，并利用生物信息学、荧光素酶载体和Westernblotting等技术验证chi-miR-4110靶基因及其对靶基因的调控作用，为提高奶山羊产羔率提供试验依据和理论基础。本研究获得的主要结果如下：1、chi-miR-4110在多羔和单羔奶山羊卵巢组织中的表达水平利用生物信息学，从卵巢差异表达miRNA文库中筛选对繁殖性状有重要调控作用且差异表达显著的chi-miR-4110，采用Realtime-PCR检测chi-miR-41

7、10在多羔和单羔奶山羊卵巢中的相对表达量显示，chi-miR-4110在多羔奶山羊卵巢中的表达量极显著（P<0.01）高于单羔奶山羊卵巢中的表达量，表明chi-miR-4110可能对奶山羊产羔性状有重要的调控作用。2、chi-miR-4110靶基因的预测及验证通过应用生物信息学对chi-miR-4110的靶基因进行综合分析，筛选出与卵巢发育相关的靶基因Smad2。构建含有Smad2-3'UTR区的双荧光素酶载体，与chi-miR-4110共转染到293T细胞中，利用荧光素酶检测系统检测荧光素酶的活性。结果显

8、示与chi-miR-4110共转染的试验组的荧光素酶活性显著低于阴性对照，表明chi-miR-4110通过与Smad2-3'UTR相互作用导致荧光素酶活性降低，初步鉴定Smad2为chi-miR-4110的靶基因。3、chi-miR-4110对靶基因的调控将chi-miR-4110和control分别转染到奶山羊卵巢颗粒细胞中，利用Realtime-PCR和Westernblotting检测Smad2mRNA以及