btg2对膀胱癌细胞ej生物学特性的影响

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1、分类号：７３７．１４密级！公开Ｗ鴻／、ｆ研究生学位论文论文题目（中文）ＢＴＧ２对膀脫癌细胞ＥＪ生物学特性的影响Ｔｈｅ－ｔａｎｔｉ化ｍｏｒｅｆｆｅｃｏｆＢＴＧ２Ｇｅｎｅ论文题目（外文）Ｏｖｅｒｅ巧ｒｅｓｓｉｏｎｏｎＣｙｔｏｂｉｏｌｏｇｙＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＥＪＢｌａｄｄｅｒＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ研究生姓名赵金匯学科、专业肿瘤学研巧方向泌尿系肿瘤学位级别硕±导师姓名、职称王志平教授论文工作起止年月２０１２年１０月至２０１４年１２月论文提交

2、日期２０；１５年３月论文答辩日期２０巧年５月学位授予日期校址：甘肃省兰州市原创性声明：本人所呈交的学位论文本人郑重声明，是在导师的指导下独立进行研巧所取得的成果。学位论文中凡引用他人己经发表或未发表的成果、数据、。观点等，均己明确注明出处除文中己经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究成果做出重要贡。献的个人和集体，均己在文中ｙＡ明确方式标明本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名、：日期：方伍＊／＿矣―处＿—／关于学位论文使用授权的声明本

3、人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属兰州大学。本人完全了解兰州大学有关保存、使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部口或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权兰州大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据。库进行检索，可Ｗ采用任何复制手段保存和汇编本学位论文本人离校后发一表、使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，第署名单位仍然为兰州大学。本学位论文研究内容：□可Ｗ公开□不宜公开，己在学位办公室办理保密申请，解密后适用本授权书。＂＂一（Ｊ选择

4、其中Ｖ）请在（ｉｌ上选项内项打２ｋ／ｉ－．导师签名：论文作者签名：５日期：／．Ｉ日期：ｌＴ、．／＞／＿＿ＢＴＧ２对膀脱癌细胞ＥＪ生物学特性的影响中文摘要目的：为了研究抗增殖蛋白ＢＴＧ２（Ｂｃｅｌｌｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｅｎｅ２ｇ，ＢＴＧ２－）在膀胁癌发生发展中的作用，本课题首先采用ＲＴＰＣＲ的方法测定不同膀－ＥＪ－－脫癌细胞株、ＢＩＵ８７、５６３７、Ｔ２４及正常的人膀脫上皮永生化细胞ＳＶＨＵＣ１中ＢＴＧ２的表达，分析人膀腕上皮永生化细胞中ＢＴＧ２的表达与膀脫癌细胞中表ＣＤＮ

5、Ａ３＋－达的差异．１ＢＴＧ２，。构建人ＢＴＧ２真核表达载体Ｐ（）筛选并鉴定膀脫癌ＥＪ细胞稳定转染细胞株，观察ＢＴＧ２对膀脫癌细胞ＥＪ形态、生长、克隆形成、迁移的影响，在细胞水平初步探讨ＢＴＧ２在膀腕癌发生发展中的作用，为未来膀脫癌基因治疗提供理论依据。方法：比较ＢＴＧ２在不同膀脫癌细胞株中的表达：用含有１０％胎牛血清的－－ＲＰＭＩ１６４０培养基培养膀腕癌细胞ＥＪ、ＢＩＵ８７、巧４、５６３７１０％，用含胎牛血清２Ｋ培ＳＶ－ＨＵＣ－ｌ的Ｆ１养基培养人膀脫上皮永生化细胞ｌ，用ＴＲＩｚｏ提取细胞总ＲＮＡ后利用ＲＴ－ＰＣＲ的

6、方法测定不同细胞中机故的表迭，分析膀脫癌细胞中－册Ｃ－ＢＴＧ２的表达量与人膀化上皮永生化细胞ＳＶ１中表达量的不同，判断细胞中ＢＴＧ２表达是否在正常细施与肿瘤细胞中存在显著性差异，闺明ＢＴＧ２基因是否参与膀脫癌的发生和进展。构建了ＢＴＧ２真核表达载体，并建立了膀腕癌ＥＪ细胞稳定转染细胞株。首先根据人ＢＴＧ２基因序列设计合适的引物，用ＰＣＲ法得到ＢＴＧ２片段，插入带有真核细胞筛选标记的ＰＣＤＮＡ３．１（＋）载化构建真核生物ＣＤ＋－载体ＰＮＡ３．１（）ＢＴＧ２表达载体。采用限制性内切酶及ＤＮＡ测序对重组体进行鉴定，

7、证实载体构建准确无误。然后将ＢＴＧ２表达质粒转染人膀化癌细胞ＥＪ，Ｇ４１８４００ｍＬ。（ｇ／）筛选出抗性克隆，扩增后筛选出单克隆稳定转染细胞株用Ｇ４１８位００ｍｇ／Ｌ）维持培养稳定转染细胞株，提取细胞总ＲＮＡ（ＴＲＩｚｏｌ），通过巧光定量ＰＣＲ和半定量ＲＴ－ＰＣＲ分析检测稳定ＢＴＧ２基因的表达转染细胞中，证实ＢＴＧ２在膀脱癌ＥＪ细胞中有效表达，最终成功建立了过表达ＢＴＧ２的膀脫癌稳定转染细胞株。ＢＴＧ２对膀化癌细胞ＥＪ生物学特性的影响：倒置显微镜下观察ＢＴＧ２对膀脫癌细胞ＥＪ形态和数量的影响；应用细胞生长曲线法

8、研究ＢＴＧ２抗细胞増殖的作用；克隆形成实验计算克隆形成率，研究ＢＴＧ２对膀脫癌细胞ＥＪ増殖能力的影响；利用划痕实验观察ＢＴＧ２对膀脫癌细胞ＥＪ