鉴别gsfv与bvdv1双重实时荧光定量pcr方法的建立

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1、、‘‘－．■私．．Ｉ．．■？，■■■■，分类号Ｓ８５２．４学校代码１０１２９ＵＤＣ６１９．学号２０１３２１６０４４Ａ義文蔡嗦乂＃硕±学位论文鉴别ＧＳＦＶ与ＢＶＤＶ１双重实时黄光定量ＰＣＲ方法的建立ｓｔＲｅａｌ－ｍｅＥａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆ化ｅｔｉＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＤｏｕｂｌｅＰＣＲ化ＩｄｅｎｔｉｆｙＣＳＦＶａｎｄＢＶＤＶｌ申请人：海日汗学位类别：兽屋硕±领域；指导教师；关平原论文提交日期二〇－五年六月：内蒙古农业大学研究生学位论文独创声明本人申明所呈交

2、的学位论文是我本人在导师指导下进行的Ｌ研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加乂标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用一过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。之处一巧相关责申请学位论文与资料若有不实，本人承捏任。论文作者签考：５＾日期：巧师舞中气内蒙古农业大孽研究生学位论文飯权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定，即：巧究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属内蒙古农业大学。本

3、工人保证毕业离校后，发表论文或使用论文作成果时署笔单位为内蒙，古农业大学，且导师为通讯作者通讯作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电１＾子文档，允许论文被查阅和借閑。学校可义公布学位论文的全部或部分巧容（保密巧容除外），采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：扇９３文指导教师签葦：鮮日３。叫、讀佛摘要一本实验为了建立种快速准确、Ｖ的、特异性强敏感性高的鉴别ＣＳＦＶ和ＢＶＤｅｎａｎｋ上已发表的猪痘病毒和牛病毒性腹泻－双重实时巧光ＰＣ民方法，根据ＧＢ黏膜病１型病毒的全基因序列，进行对比

4、分析，分别设计合成两对能特异性扩增ＣＳＦＶ和ＢＶＤＶ１的２对引物及２条探针。制备标准阳性质粒ＤＮＡ模板，对双重实时巧光定量ＰＣＲ反应参数和反应条件进行优化，并制各实时巧光ＰＣ民标准曲线，评价所建立的双重实时巧光定量ＰＣＲ反应体系的敏感性、特异性、重复性，并用本试验建立的鉴别ＣＳＦＶ和ＢＶＤＶ１的双重实时巧光定量ＰＣ民方法对８６份临床样品进行检测。’：引物浓度４００ｎｍ〇ｙＬ００ｎｍｏｌ化，５８Ｃ时所建立结果显示，探针浓度为３退火温度的双重实时巧光定量ＰＣＲ方法达到最佳的反应效果。并且此诊断方法可（＾特异的检测ＣＳＦＶ和ＢＶＤＶ１，并能与绵羊痘病毒、山羊痘

5、病毒、羊口疮病毒、小反与兽疫病．毒、牛传染性鼻气营炎病毒区分。另外，此建立的方法Ｃｔ值的变异系数均小于００１，２２ＣＳＦＶ和ＢＶＤＶ１的最小检出量分别为．０４Ｘ１０／、１．１５Ｘ１０／。表１拷贝数咕拷贝数阵明所建立的双重实时炎光ＰＣＲ方法具有较强的稳定性、较高的敏感性。运用所建立的ＰＣＲ方法检测临床样品，可队肤速、准确的检测ＣＳＦＶ巧ＢＶＤＶ１。关键词；ＣＳＦＶ；ＢＶＤＶ１；实时炎光定量ＰＣＲ；探针Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆ化ｅＲｅａｌｔｉｍｅＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＤｏｕｂｌｅＰＣ民１：０ＩｄｅｎｔｉｆｙＳＦＶａｎｄＢＶＤＶｌ

6、ＣＡｂｓｔｒａｃｔｓｔａ－Ｔｈｉｓｓｔｕｄｗａｓｄｅｓｉｎｅｄ化ｅｂｌｉｓｈａｄｕｐｌｅｘｒｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲｙｇｑｗｈｉｃｈｉｓｆａｓｔ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ｓｔｒｏｎｇｓｅｄ行ｃｉｔａ打ｄｈｉｈｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔ化ｉｄｅｎｔｉＣＳＦＶａｎｄＢＶＤＶ．ｐｙｇｙｆｙＡｃｃｏｒｄｉｎｇ化ｔｈｅｃｏｍｐｌｅｔｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＣＳＦＶａｎｄＢＶＤＶ１ｐｕｂｌｉｓｈｅｄｉｎＧｅｎＢａｎｋ，化ｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｌｙａｎ

7、ａｌｙｚｅｄａｎｄｔｗｏａｉｒｓｏｆｒｉｍｅｒｓａｎｄＴａＭａｎｒｏｂｅｓｗｅｒｅｐｐｑｐｄｅｓｉｇｎｅｄａｎｄｃｏｍｐｏｓｅｄｗｈｉｃｈｃａｎａｍｐｌｉｆｙＣＳＦＶａｎｄＢＶＤＶｌｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ．ＳｔａｎｄａｒｄｐｏｓｉｔｉｖｅｌａｓｍｉｄＤＮＡｔｅｍｌａｔｅｓｗｅｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．Ｔｈｅｒｅａｃｔｉｏｎａｒａｍｅｔｅｒｓａｎｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｐｐ