金钗石斛的种质保存、遗传多样性及叶绿体基因组研究

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1、．索取号：０７４３／７１３３密级：公开海索巧苑乂擎博±学位论文斋扁苦目眉＇＾＾ＥＤ３Ｓ８＾金奴石解的种廣保存、遗传多样性及叶绿体基因组硏究研究生：严义津指导教师：下小余培养单位：生命科学学院一级学科：生物学二级学科：植物学完成时间：化１日ｉｎＲ＂＇Ｉｉ／ｇｔｇｔＦｉｉｉｍＭｍｉｍＨｕｍｉＢｆｌＨＩＨＩ学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究、工作和取得的研究成果。本论文中除引文外，所有试验数据和有关材料均是真实的，不包含其他人或其它。本论文中除引文和

2、致谢的内容外机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了声明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期；側、ｔＡ学位论文使用授权声明研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属南京师范大学。学校有权保存本学位论文的电子和纸质文巧，可Ｗ借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容、复印等手竣無存、汇编，可！＾采用影印本学位论文。学校可Ｗ向国家有关机关或机构送交论文的电子和纸质文。档，允许论文被查阅和借阅（保密论文在解密后遵守此规定）保密论文注释：保密：本学位论文属于保密论文，密级化片？期限为。年学位论文作者签名指导教师

3、签名：Ｉ曰親曰期：１１／１巧要公Ｌ’金铁石解（６？办〇６沾》！／２〇６抓ｉｎｄｌ．）为兰科石解属（Ｄｅ？ｗ／ｒｃ伽ｗｍ）珍稀药用植物，早在《神农本草经》中就有记载，为中国溺危物种，具有滋阴生津、涧肺明目、抗癌防老等功效。近年来，由于金软石解的大规模开发利用，致使其野生资源遭到毁灭性的破坏，并导致了金较石解混淆品的泛滥。因此，务须加强对金铁石解野生资源种质的研究与保护，并建立有效的金紋石解种质鉴别的可靠手段。本论文开展了金紋石解的种质保存工作一。发明了种提高金紋石餅传粉结实率的方法及专用处理剂，申请了专利Ｎ〇、８〇、。专用处理剂为含有Ｃａ（３）２

4、战３旗糖２４－Ｄ的、尿素、赤霉素及，水溶液。主要流程包瓶亲本选取、对传粉时间的选取一、人工传粉、套袋处理、金紋石餅种子的收集、无激素的组织培养。上述种提高金铁石解传粉结实率的方法及专用处理剂可Ｗ明显提高金铁石解的结实成功率，可，提高种子产量，而且操作简便，易于掌握Ｗ在大规模人工育种中推广应用。本论文采用磁珠富集法对金铁石解微卫星进行了开发。共设计了５３对微卫３４４５星引物，利用云南、贵州和广西省个居群的个样本，筛选了１０对多态性１０位点丰富的引物。分析表明：这对微玉星引物具有较高的多态性，平均多态信息含量（ＰＩＣ的变化范围从０．５５到０．８５ＰＩＣ＞

5、０．５０，表明１０个Ｓ化位点具）（）有足够的信息，可Ｗ在金较石解居群遗传多样性研究上得到应用。本论文开展了金铁石解野生居群保护遗传学研究。开发并筛选了９对多态性微卫星引物，对７个金铁石解居群进行了遗传多样性及遗传结构的研究。运用多种遗传分析软件，推测了自然选择、遗传漂变Ｗ及基因流等进化力量在金紋石解野生居群形成中的作用，阐述了对金紋石解野生居群种质的保护策略。通过运用一１０２１４８筛选出的９个微卫星引物的检测，在个金铁石餅野生个体中，共有￣１２个等位基因位点；每个微卫星位点的等位基因数从３２不等，每个位点的等位？１６０７９４基因数的平均值为．４，表观杂合度（

6、Ｈｏ）的范围是从０．５０３．（平均值为０６９５Ｈ范围是从０６２３？０９０９．），期望杂合度（ｅ）的．．巧均值为化７４。这９个微）卫星位点都表现出了相对较高的Ｐ￣ＩＣ值（从０．５４６０．８如，平均值为化６７５），说明这９个微卫星位点可Ｗ用于揭示中国西南部（海南岛，中细边境，云南省，贵州省，广西省，四川省等地区）金铁石解野生居群的遗传多样性和遗传分化。结果显示，海南岛与内陆居群分化较大，并且遗传多样性化及遗传变异值较低。必须对海南岛的金较石解野生居群开展就地保护，包括生境的修复，Ｗ确保海南岛金铁石解居群的遗传多样性水平并保护其进化潜力；同时开展迁地保护，海南岛居群

7、中的稀有位点个体应当Ｗ最高优先级保护，其次是保护具有稀有位点Ｗ及最多共同位点的个体，此确保维持该物种并保持其进化潜力。Ｉ本论文还开展了叶绿体基因组比较及序列分析，开发了金铁石解的叶绿体基因组中的微卫星标记ｃｐＳＳＲＷ及叶绿体片段标记用于混淆品种间鉴别。结果（）显示：金铁石解与石解属其他物种的叶绿体基因组的大小相似，且化区域较为，金铁石解的叶绿体基因组的大小为１５０７９３