裸鼠肾癌模型中mir-21与pdcd4相互作用的研究

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1、分类号UDC密级编号硕士学位论文裸鼠肾癌模型中MiR-21与PDCD4相互作用的研究ThestudyoftherelationshipbetweenMiR-21andPDCD4inanudemouserenalcancermodel学位申请人：袁海鑫指导教师：张建国教授一级学科：临床医学二级学科：外科学学位类别：医学硕士2015年05月独创性声明本人声明，所呈交的论文是我个人在导师指导下完成的研究工作及取得的研究成果。据我所知，文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，

2、也不包含为获得河南科技大学或其它教育机构的其他学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：日期：摘要摘要目的：在肾细胞癌（RCC）细胞系和组织中，microRNA-21（miR-21）下调程序性细胞死亡因子4（PDCD4）抑制细胞恶性转化，细胞的增殖和转移。本研究的目的是探讨裸鼠肾癌模型中，PDCD4和miR-21之间的相互作用关系和角色。方法：24只雄性BALB/c裸鼠随机分为三组（阴性对照组（n=8），miR-21inhibi

3、tor组（n=8），miR-21mimic组（n=8））。将786-O细胞移植到小鼠腋下，每天小鼠分别注射negativecontrolsiRNA，pre-mir-21（mimic）和anti-miR-21（inhibitor）。786-O细胞移植后16天，取下荷瘤小鼠的肿瘤并称重。另外，采用实时定量RT-PCR分析肿瘤组织中miR-21和PDCD4mRNA的表达。在肿瘤组织中PDCD4蛋白的表达，采用免疫组织化学和Westernblot检测。此外，786-O细胞分别转染PDCD4siRNA和negat

4、ivecontrolsiRNA，采用软琼脂集落形成，EDU增殖实验和侵袭迁移实验研究沉默PDCD4对肿瘤细胞生长、增殖、侵袭的影响。另取16只雄性BALB/c裸鼠随机分为两组：阴性对照组（n＝8）和PDCD4siRNA组（n=8），然后786-O细胞移植到腋下，试验小鼠每天分别注射negativecontrolsiRNA或PDCD4siRNA，移植后16天，取下荷瘤小鼠的肿瘤并称重。结果：与阴性对照组相比，在miR-21mimic组肿瘤重量明显增加，然而，在miR-21inhibitor组肿瘤重量显著降

5、低（P＜0.05）。与人肾癌组织和细胞系的结果类似，在裸鼠肾癌模型中，miR-21mimic组中miR-21的表达与阴性对照组相比显著上调，然而，在miR-21inhibitor组miR-21的表达显著降低。此外，观察到在miR-21mimic组PDCD4蛋白水平显着减少，而在miR-21inhibitor组显著增加（P＜0.05），而三组肿瘤组织中PDCD4mRNA的表达水平没有差异（P＞0.05）。在EDU增殖实验中，阴性对照组（NC组）的增殖率为(28.6±2.3)%，PDCD4siRNA组的增殖

6、率为（44.7±3.6）%，两组差异有统计学意义（P<0.05）。在软琼脂集落形成实验以及迁移和侵袭实验中，PDCD4siRNA转染组细胞中克隆形成和侵袭能力显著增加（P＜0.05）。此外，与阴性对照组相比，PDCD4siRNA组肿瘤重量明显增加（P＜0.05）。结论：与人肾癌组织和细胞系的结果类似，miR-21在促进肾癌细胞生长、增殖和侵袭，且在裸鼠肾癌模型中，miR-21转录后下调PDCD4蛋白表达促进肿瘤生长。我们的结果与其它研究表明，在肾细胞癌中miR-21和PDCD4可能发挥I摘要重要作用，提

7、示增加PDCD4表达或抑制miR-21的表达可能是治疗肾癌的新的有效的治疗策略。关键词：MiR-21；PDCD4；裸鼠；肾细胞癌论文类型：基础研究选题来源：其他IIABSTRACTABSTRACTPurpose:ProgrammedCellDeath4(PDCD4)suppressedneoplastictransformation,cellproliferation,andmetastasisandwasdownregulatedbymicroRNA-21(miR-21)inrenalcellcarc

8、inoma(RCC)celllinesandtissues.TheaimofthisstudywastoinvestigatetherolesandinteractionsbetweenPDCD4andmiR-21inanudemouserenalcancermodel.Methods:24BALB/cmalenudemicewererandomlyassignedtothreegroups(negativecontrolgroup(n=8