老化髓核细胞的致退变效应及其机制的探索

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1、表兩大聲硕壬学位论文老化Ｕ核细胞的致退变效应及其机制的探索专业名称：外巧学研究生姓名：崔佳ｇ导师姓名：吴小法教巧ＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｎｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｂｙｓｅｎｅｓｃｅｎｔＮｕｃｌｅｕｓＰｕｌｏｓｕｓｃｅｌｌｓｐＡＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＳｕｂｍ化ｅｄ化ＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＦｏｒｔｈｅＣｌｉｎｉｃａｌＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅＢＹＣ山ＪｉａｑｕＳｕｐｅｒｖｉｓｅ

2、过ｂｙＰｏｆｅｓｓｏｒ－ｒＷｕＸｉａｏｔａｏＳｃｈｏｏｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＡｒｉｌ２０１５ｐ东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使巧过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文

3、中作了明确的说明并表示了谢，研究生签名：戸户日期：王叫广个引戸东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印，可Ｗ采用影印件和电子文档、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，，可公布（包。除在保密期内的保密论文外允许论文被查阅和借阅括刊登）论文的全部或部分内容。论文的公布（包登）授权东南大学研究生院办理。＞７＾研究生蔡名Ｉ。￣－；导师ｗ日期：三作仁／中文摘要老化髓核细胞的致退变效应及其

4、机制的探索东南大学医学院研究生：崔佳嬰导师：吴小涛教授中文巧要目的：体外建立人髓核细胞复制性老化和血清剥夺诱导老化的模型，探索两种老化髓核细胞对正常髓核细胞的致退变效应并探索其机制。方法：１、体外连续传代、培养人正常髓核细胞，模拟髓核细胞复制性老化过程；２、体外无血清培养基培养第９代髓核细胞，诱导髓核细胞老化；３Ｓ－－Ｇｌ、分别对步骤Ｉ中的各代细胞及步骤２中的细胞行显微镜观察髓核细胞形态、Ａｐａ染色计数细胞老化率、流式细胞仪检测Ｇ１期细胞比例，制备两组髓核细胞老化模型（本研

5、究中拟定老化率三８０％、Ｇ１期细胞三８０％的造模组为合格的髓核细胞老化模型）；４９－、免疫巧光法观察Ｐ代髓核细胞中ＴＧＦ＾ｌ的表达，同时对第９代髓核细胞、复制性老－－Ｓ３化模型，采ＰＣＲ检测３组细胞ＴＧＦｉ１、血清剥夺诱导老化模型组细胞用ＱＲＴ的表达含量；５、建立老化髓核细胞和正常髓核细胞共培养体系，观察共培养体系中正常髓核细胞的活力－Ｋ指标，Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ检测共培养体系中正常髓核细胞中ＥＲ、Ａｋｔ两条信号传导通路的表达情况。结黑１、在建立髓核细胞复制性老化模型过程中，随

6、着细胞传代次数的增加，髓核细胞形态逐渐由类圆形、星形、短梭形向长梭形、不规则形等转变，细胞体积逐渐増大、胞质变脆、胞－Ｓ－Ｇａ浆空泡化明显。Ａｐｌ染色计数髓核细胞老化率、流式细胞仪检测Ｇ１期细胞比例，传至〇〇Ｐ１３代时两者比例分别为８４．１３±４．７／〇、８７．５９±３．０／〇；２，，、在无血清培养基培养髓核细胞的模型中第７ｄ观察髓核细胞形态细胞形态呈不规则－－形，ＳＡＧａｌ染色计数髓核细胞老化率、流式、长梭形转变胞质变脆、胞浆空泡化明显。ｐ０％－－细胞仪检测Ｇ胎牛血清组明显增高，其中Ｓ

7、ＡＧａｌ染色计数髓核细１期细胞比例较含１ｐ±±４胞老化率为８６．７０６．０％，流式细胞仪检测Ｇ１期细胞比例为８８．３４．４％；ＧＦ－－ＰＣＲ实验结果显示３、９＾ｌ，在复制性免疫巧光法检测提示Ｐ代髓核细胞表达Ｔ，ＱＲＴＩ东南大学硕±学位论文－老化模型和血清剥夺诱导老化模型中，ＴＧＦ＾ｌ的表达量较正常髓核细胞均有所减少，差－异较对照組有统计学意义（Ｐ＜０．０５），两个老化模型組中ＴＧＦ＾ｌ的表达量相近，差异无＞〇统计学意义（Ｐ．〇５）；４、在老化髓核细胞与正常髓核细胞共培养体系中，第

8、７ｄ观察共培养体系中正常髓核细（））胞的活力指标，发现实验組Ａ（复制老化髓核细胞Ｐ１３代与正常髓核细胞共培养、实验组Ｂ（血清剥夺诱导老化的髓核细胞与正常髓核细胞共培养）中老化率及Ｇ１期细胞比例－（Ｐ＞〇〇５Ｗｔｂｌｏｔ较对照组单纯正常髓核细胞培养）中均有所上升，差异无统计学意义（．）；ｅｓｅｍ检测提示对照组，、实ｋ组Ａ、实验组Ｂ中正常髓