探析海藻糖对神经干细胞玻璃化冻存过程影响的研究

《探析海藻糖对神经干细胞玻璃化冻存过程影响的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、大连理工大学硕士学位论文海藻糖对神经干细胞玻璃化冻存过程影响的研究姓名：陆凯申请学位级别：硕士专业：化学工程指导教师：马学虎20070601大连理】：大学硕十学位论文摘要为获得来源方便的神经干细胞，开展有效的干细胞移植及建立于细胞库，需长期低温保存神经干细胞。本文研究了神经干细胞在培养过程中海藻糖的影响和海藻糖的玻璃化能力，并进行神经干细胞的玻璃化冻存过程的研究。首先，对海藻糖在神经干细胞培养过程的影响进行了研究。在神经干细胞培养过程中分别加入Omol／L、0．3mol／L、0．15mol／L、0．075mol／L、0．05mol／L、0．025mol／L的海藻糖，通过CCK-8

2、试剂盒连续六天进行测试，结果显示在神经干细胞培养过程加入海藻糖不会影响细胞的增值，同时保持了其干细胞的特征，并且可以诱导分化为神经元、少突胶质细胞、星型胶质细胞，从而确保了海藻糖应用于神经干细胞玻璃化冻存的安全性。其次，通过低温冷台和差示扫描量热实验，对海藻糖与蔗糖的玻璃化能力进行了比较，主要考察了玻璃化转变温度和反玻璃化的情况。在低温冷台上在i00℃／min降温速率下，60％海藻糖和60％蔗糖均能实现玻璃化，但在以相同升温速率复温的过程中都有反玻璃化现象，60％蔗糖比6096海藻糖反玻璃化严重。在1009C／min降温速率下，海藻糖能够实现玻璃化的最低浓度是55％，而蔗糖能够实

3、现玻璃化的最低浓度是58％。采用差示热量扫描技术测量样品的玻璃化转变温度，60％海藻糖、55％海藻糖、60％蔗糖和58％蔗糖溶液玻璃化转变温度分别为-29．7"C、一30．8℃、一39．4℃和一45．6℃。最后，将海藻糖与二甲基亚枫、乙二醇、乙酰胺组成联合冷冻保护剂用于神经干细胞的玻璃化冻存。通过在冷台上动态直观地观察，以及玻璃化冻存神经干细胞复苏率的比较，优选出了适合神经于细胞玻璃化冻存的冷冻保护剂组成为：20％(v／v)二甲基亚砜(嘶SO)+2096(v／v)乙二醇(EG)+1096(w／v)乙酰胺(Acetamide)+0．5(M)海藻糖(Trehalose)。将优选出的冷

4、冻保护剂分别用于两种神经干细胞的玻璃化冻存，一种是培养过程没有加入海藻糖，另外一种是培养过程加入0．05mol／L的海藻糖，实验结果显示神经干细胞在培养过程加入海藻糖对细胞玻璃化冻存后的复苏率有明显的提高，同时本文的实验结果与文献中报道过的20％(v／v)DMSO+2096(v／v)EG+10％(w／v)Acetamide+O．3(mol／L)Sucrose玻璃化冻存神经干细胞的复苏率也进行了比较，结果表明，在神经干细胞培养过程加入0．05mol／L的海藻糖，用本文优选出的保护剂玻璃化冻存后的复苏率为71．7％。关键词：神经干细胞；海藻糖；保护剂；玻璃化海藻糖对神经干细胞玻璃化冻

5、存过程影响的研究InfluenceofTrehaloseontheVitrificationCryopreservationofNeuralStemCellsAbstractItisnecessarytoachievethelong-tarmcryopreservationofNeuralstemcells(NSCs)foritsoffshelfavailability．Thispapermainlyinvestigatetheinfluenceoftrehalosetothesterncellcultureprocessanditsvitrificationability，an

6、dthenthevitrificationcryopreservationofNSCswaspreliminarilyconductedbyaddingthetrehaloseinCPA．Firstly，theinfluenceoftrehalosetothestemcellcultureprocesshasbeeninvestigated．AddingtrehalosewithconcentrationofOmoI／L、0．3mol／L、0．15mol／L、0．075mol／L、0．05mol／L、O．025mol／LresepectivelyduringtheNSCscult

7、ureprocess．andbeingtestedcontinuouslybycck-8agentkitsforsixdays，itwasfoundthattheadditionoftrehaloseduringtheNSCscultureprocesscouldnotaffecttheproliferationofcell，butkeptthecharacteristicofthestemcell，differentiatingintoneurons,oligodendroey