基于TLR2_NF-κB信号通路探讨电针对脑缺血再灌注大鼠脑组织中GDNF的作用机制

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1、成都中医药大学2018届硕士学位论文成都中医药大学（养生康复学院）二0一八届硕士研究生学位论文基于TLR2/NF-κB信号通路探讨电针对脑缺血再灌注大鼠脑组织中GDNF的作用机制ResearchaboutthemechanismofGDNFtreatedwithElectroacupunctureincerebralischemiareperfusionratsbasedontheTLR2/NF-κBsignalingpathway.研究生姓名：许潇莹学科专业：康复医学与理疗学研究生学号：2015S330二○一八年五月1成都中医药大

2、学2018届硕士学位论文学位论文基于TLR2/NF-κB信号通路探讨电针对脑缺血再灌注大鼠脑组织中GDNF的作用机制ResearchaboutthemechanismofGDNFtreatedwithElectroacupunctureincerebralischemiareperfusionratsbasedontheTLR2/NF-κBsignalingpathway.许潇莹指导教师姓名：艾双春主任医师申请学位级别：硕士专业名称：康复医学与理疗学论文提交时间：2018年5月论文答辩时间：2018年5月二〇一八年五月1成都中医药大

3、学2018届硕士学位论文中文摘要目的：通过检测电针刺激“内关”“水沟”“委中”“三阴交”穴后，脑缺血再灌注损伤大鼠在不同时间点上IRAK、TAK1、GDNF的表达水平，观察电针对脑缺血再灌注大鼠脑组织中GDNF的调控作用，并深入探讨电针调控GDNF表达的分子机制。方法：将120只清洁级健康雄性SD大鼠，随机分为空白组、假手术组、模型组、电针组及抑制剂组5组，每组根据治疗3、7、14、28天分为4个亚组，各亚组6只大鼠。模型组、电针组、抑制剂组参照Longa改良线栓法，制备右侧大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注模型。造模后，对大鼠进行神经功

4、能学评分判断造模是否成功。造模成功后第3天，对电针组选取“内关”“水沟”“委中”“三阴交”穴进行操作，刺激强度以针柄轻微抖动，大鼠无剧烈挣扎为度，每次30min，1次/日；抑制剂组腹腔注射NF-κB抑制剂PDTC后再行电针，电针操作同电针组；同时间段其余组大鼠抓取固定，不予任何操作。在治疗后第3、7、14、28天的时间点，经过对各组大鼠的神经行为学观察后，随机选取6只处死取脑，提取大鼠大脑患侧缺血半暗带的脑组织，应用实时荧光定量PCR法检测IRAK、TAK1、GDNF的mRNA表达水平。结果：1脑缺血模型完成情况：本实验造模大鼠总数

5、共120只，入选实验鼠85只，造模成功率70.8%。在被剔除的大鼠中，造模失败者12只，死亡者23只（3只死于麻醉过量，5只死于术中操作不当，15只死于术后脑缺血损伤过重、感染或脑出血）。2大鼠神经功能评分：空白组、假手术组无神经功能损伤表现，评分均为0分，假手术组与空白组相比，评分无差异，无统计学意义（P＞0.05）。治疗前，模型组、电针组、抑制剂组与空白组相比，评分差异具有统计学意义（P＜0.05）；治疗后各个时间点，电针组、抑制剂组与模型组相比，神经行为评分均呈现逐渐降低的趋势，在治疗第3、7、28天，差异具有统计学意义（P＜

6、0.05）。3缺血半暗带脑组织IRAKmRNA的表达变化：模型组与空白组相比，模型组IRAKmRNA的表达水平在治疗后第3天明显1成都中医药大学2018届硕士学位论文上调（P＜0.05）；与模型组相比，电针组在治疗第3天IRAKmRNA的表达水平明显下调，第14天明显上调（P＜0.05），抑制剂组在第3天明显下调（P＜0.05）；抑制剂组与电针组相比，在治疗第3、14、28天IRAKmRNA的表达水平下调明显（P＜0.05）。4缺血半暗带脑组织TAK1mRNA的表达变化：模型组与空白组相比，模型组TAK1mRNA的表达水平在治疗第3

7、、14天明显上调（P＜0.05）；与模型组相比，电针组在治疗第3、7、14天TAK1mRNA的表达水平明显下调（P＜0.05）；抑制剂组与电针组相比，在治疗第3、28天TAK1mRNA的表达水平下调明显（P＜0.05）。5缺血半暗带脑组织GDNFmRNA的表达变化：模型组与空白组相比，模型组GDNFmRNA的表达水平在治疗第3、7、14天明显上调（P＜0.05）；与模型组相比，电针组在治疗第14、28天GDNFmRNA的表达水平明显上调（P＜0.05），抑制剂组在第3、7、14天明显下调；抑制剂组与电针组相比，各时间点GDNFmRN

8、A的表达水平下调明显（P＜0.05）。结论：电针刺激“水沟”、“内关”、“委中”、“三阴交”穴持续上调脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中GDNF的表达，进而保护脑神经，改善神经功能缺损症状，其作用机制可能与下调IRAK、TAK1后抑制TLR