_ 改良羊水染色体检测技术的研究

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1、温州医科大学硕士学位论文分类号：单位代码：10343学号：139007011同等学力申请硕士学位论文论文题目:_改良羊水染色体检测技术的研究____________________________________研究生姓名：范佳鸣学科专业：临床检验诊断学类型：学术型指导教师：楼永良二O一七年九月万方数据温州医科大学硕士学位论文论文题目:改良羊水染色体检测技术的研究答辩委员会主席：颜卫华研究员浙江省台州医院答辩委员会成员：包其郁教授温州医科大学吕斌教授温州医科大学李祥副教授温州医科大学沈波教授浙江省台州医院李招云教授台州市中心医院论文答辩日期：20

2、17年12月7日万方数据温州医科大学硕士学位论文目录缩略词表………………………………………………………………1中文摘要………………………………………………………………2英文摘要………………………………………………………………5前言……………………………………………………………………8材料和方法……………………………………………………………10结果……………………………………………………………………21分析与讨论……………………………………………………………33小结……………………………………………………………………39正文参考文献……………………

3、……………………………………40致谢……………………………………………………………………42综述……………………………………………………………………43综述参考文献…………………………………………………………48论文独创性声明………………………………………………………52万方数据温州医科大学硕士学位论文缩略词表缩写英文全称中文全称array-CArray-basedComparativeGenomic微阵列比较基因组杂交技术GHHybridizationBacterialArtificialChromosomeonBeadsBOBs胎儿液态基因芯

4、片检测技术ArraysDSDownSyndrome唐氏综合征FISHFluorescenceInSituHybridization荧光原位杂交技术人类细胞遗传学命名国际体ISCNInternationalSystemforhumanCytogenetic制NIPTNon-invasivePrenatalTesting无创产前DNA检测ONTDsOpenNeuralTubeDefects开放性神经管缺陷QuantitativeFluorescentQF-PCR荧光定量PCRPolymeraseChainReactionRHRelativeHumid

5、ity相对湿度SOPStandardOperatingProcedure标准操作程序TTemperature温度1万方数据温州医科大学硕士学位论文改良羊水染色体检测技术的研究中文摘要目的:染色体病是造成新生儿出生缺陷的重要原因之一，可以通过产前诊断来预防患儿出生，目前应用于临床产前诊断的检测技术主要是通过获取胎儿细胞进行染色体核型分析，样本包括绒毛、羊水、脐血。随着分子技术在遗传学领域中的应用，FISH、QF-PCR、DNA芯片等检测技术逐渐在临床开展，这些技术具有各自的检测优势又同时存在一定的局限性，传统的染色体检测技术在产前诊断中仍起着无可替

6、代的作用。羊水染色体检测技术是目前临床开展产前诊断的主要检测手段，包括羊水细胞培养和染色体制备技术。由于羊水培养易污染，染色体制备技术操作繁琐等特点，在一定程度上限制了临床开展的羊水量。随着产前筛查的广泛开展以及二胎的政策开放，产前诊断需求量急剧增加，有限的羊水量与临床需求的矛盾日趋激烈，由此研究人员不断探索，目的是为了得到一个高成功率、高质量、高效率的技术方法，以满足临床需求。对羊水染色体检测技术的改良，本研究首先改进实验室羊水细胞培养操作,包括构建两个独立平行操作体系，修订无菌操作SOP及质控管理，同时建立了羊水细胞污染处理流程，确保羊水细胞

7、成功培养和实验的有序进行。研究染色体的分散，为染色体制备技术改良实验提供稳定一致的最适染色体分散条件，在此基础上，重点建立了快速羊水染色体制备技术—微量高速离心法。微量高速离心法的建立是在保证染色体质量的前提下，创新采用高速离心制备，同时缩减整个操作体系至2mL微量离心管中，结合高浓度秋水仙素的应用，极大的提高了制备效率。通过与传统制备方法进行比对实验，评估微量高速离心法的制备质量，同时对临床产前诊断标本进行检测来探讨该改良方法在临床产前诊断中应用的可行性。方法:1、改进羊水细胞培养操作流程体系，构建两个独立平行的操作培养体系。制定严格的无菌操作

8、程序（SOP）和质控管理，同时建立污染羊水的处理SOP。2、改良染色体制备-微量高速离心法的建立。2.1染色体分散的研究。染色体在不同的