大鼠子宫去细胞化支架的制备和鉴定

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1、温州医科大学硕士学位论文分类号：R7单位代码：10343学号：149001051同等学力申请硕士学位论文论文题目:大鼠子宫去细胞化支架的制备和鉴定研究生姓名：郭芳学科专业：妇产科学类型：学术型指导教师：郑飞云二O一八年三月温州医科大学硕士学位论文论文题目：大鼠子宫去细胞化支架的制备和鉴定答辩委员会主席：林俊教授浙江大学附属妇产科医院答辩委员会成员：颜笑健教授温州医科大学附属第一医院吴雪清教授深圳大学总医院胡燕主任医师温州医科大学附属第一医院欧荣英主任医师温州医科大学附属第一医院论文答辩时间：2018年05月28日温州医科大学硕士学位论文目录一、缩略词表……………………………………………

2、………………2二、摘要1、中文摘要………………………………………………………………32、英文摘要………………………………………………………………4三、论文正文1、前言……………………………………………………………………52、材料和方法……………………………………………………………73、结果…………………………………………………………………154、分析和讨论…………………………………………………………295、小结…………………………………………………………………306、参考文献……………………………………………………………31四、附录…………………………………………………………………34

3、五、致谢…………………………………………………………………35六、综述1、综述正文……………………………………………………………362、参考文献……………………………………………………………40七、独创性声明………………………………………………………451温州医科大学硕士学位论文缩略词表缩写词英文全称中文全称HEHemotoxylinandeosin苏木精伊红DNADeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸MTT3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四

4、氮唑溴盐STZStreptozoticin链脲佐菌素SDSpragueDawley斯泼累格·多雷PBSphosphatebuffersaline磷酸盐缓冲液SPFSpecificpathogenFree无特定病原体SDSSodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠EDTAEthylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟ODOpticaldensity光密度EGFEpidermalGrowthFactor表皮细胞生长因子bFGFBasicfibroblastgrowthfact

5、or碱性成纤维细胞生长因子TGF-βTransforminggrowthfactor-β转化生长因子-βHRPHorseradishPeroxidase辣根过氧化物酶DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜ECMExtracellularmatrix细胞外基质GAGAminoglycan氨基聚糖RPMIRoswellParkMemorialInstitute罗斯维尔公园纪念研究所DAPI4',6-diamidino-2-phenylindole4',6-二脒基-2-苯基吲哚KRBHKrebs-RingerbicarbonateHepesbufferKrebs-Ringer碳

6、酸氢盐缓冲液LUALeftuterineartery子宫左动脉PEpolyethylene聚乙烯2温州医科大学硕士学位论文大鼠子宫去细胞化支架的制备和鉴定中文摘要目的通过去细胞化灌注技术，探讨成功制备天然子宫去细胞化生物支架的理想灌注策略，并通过系统的评价体系，以鉴定其能否作为子宫组织再生工程研究的良好应用载体。方法以健康成年雌性SD大鼠为实验对象，以子宫动脉作为灌注入路，通过物理冻融、胰酶酶解及曲亚通（TritonX-100）为主辅以十二烷基硫酸钠（SDS）的洗脱灌注组合等流程，获取子宫去细胞支架。并通过大体形态观察、美兰染色、组织病理学观察、基因组DNA定量分析、细胞因子含量测定、

7、电镜观察、胶原蛋白总量检测及主要胶原成分鉴定及免疫原性实验等对去细胞化后的子宫支架进行全面的评价。结果成功建立动脉灌注入路并获得了肉眼透明的子宫去细胞化支架，HE染色观察和透射电镜结果均显示去细胞支架内无有核细胞残留，DNA含量检测证实支架内DNA残留量不足正常子宫的5%，美兰染色和扫描电镜显示支架的脉管网络和空间结构保存完整；而胶原蛋白的定量定性分析表明去细胞化后支架的细胞外基质成分保留得较为完整，酶联免疫吸附试验（ELISA）结果显示去细胞