基于核酸质谱技术快速鉴定常见血流感染病原菌

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1、分类号：R446.5单位代码：10343学号：151004635硕士学位论文论文题目:基于核酸质谱技术快速鉴定常见血流感染病原菌研究生姓名：张可昕学科专业：临床检验诊断学类型：学术型指导教师：王成彬二O一八年五月论文题目：基于核酸质谱技术快速鉴定常见血流感染病原菌答辩委员会主席：丁焕根教授答辩委员会成员：申志发教授谭国强副研究员论文答辩日期：二0一八年五月II温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………3前言…………………

2、…………………………………………………5第一部分核酸质谱技术鉴定血流感染病原菌方法的建立与评价…………………………………………………………8一、前言…………………………………………………………8二、材料与方法…………………………………………………8三、结果…………………………………………………………17四、分析与讨论…………………………………………………22五、小结…………………………………………………………24第二部分核酸质谱技术鉴定血流感染病原菌方法的临床标本验证…………………………………………………………25一、

3、前言…………………………………………………………25二、材料与方法…………………………………………………25三、结果…………………………………………………………30四、分析与讨论…………………………………………………40五、小结…………………………………………………………44全文总结………………………………………………………………44英文缩略表……………………………………………………………44参考文献………………………………………………………………45附录……………………………………………………………………48III温

4、州医科大学硕士学位论文致谢……………………………………………………………………50综述及参考文献………………………………………………………51在读期间发表的论文…………………………………………………60独创性声明……………………………………………………………61IV温州医科大学硕士毕业论文基于核酸质谱技术快速鉴定常见血流感染病原菌中文摘要目的1.应用基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrix-AssistedLaserDesorption/IonizationTimeofFlightMassSpectromet

5、ry，MALDI-TOFMS）技术的核酸质谱系统，建立一种快速、准确、灵敏、特异的检测常见血流感染病原菌的方法；2.对基于核酸质谱技术快速鉴定常见血流感染病原菌检测方法的检测限确定及稳健性评价；3.收集临床标本对所建方法进行临床验证。方法1.筛选10种血流感染常见病原菌，找到每种细菌毒力因子序列的相对保守区，设计2组5重聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）扩增引物，及各菌种的单碱基延伸（singlebaseextension,SBE）引物，建立基于MALDI-TOFMS的核酸质谱系统血

6、液致病菌检测方法，并优化实验条件。2.收集实验室标准菌株及临床分离菌株，提取细菌基因组DNA进行MALDI-TOF质谱检测，并进行灵敏性、特异性、重复性、抗干扰性实验。3.对121例临床拟诊为细菌血流感染的患者于患者出现寒战、发热初期时，在严格无菌操作下采集全血标本，提取DNA进行核酸质谱系统检测，同时送检血培养，查CRP、血常规指标。对同期住院的20例非感染性疾病患者也采集血标本进行核酸质谱系统检测及部分感染指标检查。用SPSS22.0FORWindows进行临床资料数据分析。结果1.本研究所建立的核酸质谱系统血流感

7、染病原菌检测方法可同时检测两组的10种细菌，所有细菌样本均可见延伸峰；对各菌株的检测灵敏度均达到100CFU/mL（colony-formingunit，CFU，克隆形成单位）。2.选择本院临床分离菌株制备模拟感染血液样本进行核酸质谱系统检测，该方法对同一种病原微生物的标准菌株和不同临床分离菌株的检测结果一致。3.121例拟诊为细菌血流感染的患者，按照临床诊断标准（附录4），临床诊断为细菌血流感染有49例，非细菌血流感染72例。121例拟诊为细菌血流感染的患者，血培养检测结果阳性41例，核酸质谱系统检测阳性43例。20

8、例非感染组患者核酸质谱系统检测结果均为阴性。核酸质谱系统检测方法的敏感性、特异性、阳性、阴性预测值、诊断效率及诊断指数分别为：83.76%、97.22%、95.35%、89.74%、91.74%、180.98。核酸质谱系统检测方法所需时间短，一次检测只需9到10小时即可完成。结论本研究建立的核酸质谱检测系统，把简单、可靠的多重PC