体外构建组织工程化口腔粘膜实验的研究

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1、上海第二医科大学博士学位论文(2004年)OKC0FCCKDABDMEMEDTAEGFKGMLSABPBSTBSBPEDMS0PDT英文缩略语表OralKeratinocytes口腔粘膜上皮细胞OralFibroblast口腔粘膜成纤维细胞Cytokeratin角蛋白Diaminobenzidine二氨基联苯胺Dulbeco’SModifledEagle’SMedium杜氏改良依格培养液EthyleneDiaminetetraaceticAcid乙二胺四乙酸Epidermalgrowthfactor上皮细胞生长因子Keratinocytesgrowthmed

2、ium角化细胞培养液LabeledStreptavidinBiotin标记抗生链菌素生物素PhosphateBufferedSaline磷酸盐缓冲液TtisBufferSaline三羟甲基氨基甲烷缓冲生理盐水bovinepituitaryextractionsupplement牛垂体提取物DimethylSulfoxide二甲基亚砜populationdoublingtime群体倍增时间体外构建组织工程化口腔粘膜的实验研究英文缩略语表上海第二医科大学博士学位论文(2004年)巾文摘要～髫的：ll应用缀织工程的方法，探讨研制一种适合于临床应用的组织工程化复合粘

3、膜2。凌较嚣耱生羲支絮耱瓣PGA及Allodcrm在榴建日襄凝璇筑缓方瑟夔饶劣方法：体外培养、扩增狗朋腔粘膜上皮细胞，通过细胞形态学及角蛋白免疫组化染色等藩囊藏遴行定淫磷突；逶逑溅定绥糕生长蘧线及群薅倍蓬野麓，了绥绥魏嫩长基零规律及其增殖能力。将培养的狗口腔粘膜上皮细胞接种于AUoDerm上，构建组织工程化狗瑚腔粘膜，遇过HE染色观祭组织形态，免疫组化染饿检测p63和Ki67；薅羚臻舞、扩壤入潮腔穗簇主受缮麓莘委残绎缀缀藏，逶过缀脆形态学及筠蛋叁、波形蛋白免疫组化染色等对细胞进行定性研究；通过测定细胞生长曲线及群体倍增时间了解绷胞生长基本规律及其增穗麓力。用

4、MTr法检测口腔粘膜上皮细胞及成纾维缀藏褒PGA上静臻壤情况，醑炎箕生耱稻饔穗。蒋若葬兹入露验糖膜戒纤维缨胞接种于PGA上，培养7天后再按种上皮细胞于液面，体外形成活的粘膜样组织。通过HE染色观察组织形态，用Masson染色观察胶原分布和形态，用RT-PCR检测胶原类鍪，角蛋自兔疫魏仡染色了解上皮层缁臆灞嬗能力。结果：1．采用胰鬣自酶消化法，用无血清热他缨瑰培养液，在无3T3躐胞的条件下避续传代培养狻正常霸腔嵇膜上疫缀魄，可传6—7代，存活40一50天；珞养细融其有狗口腔粘膜上皮细胞的典型形态。接种于AlloDerm上，第18天可以形成角化良好的缀织工程化狗

5、翻腔糙骥，与聪臀狗臼腔糙膜类似，P63酾赳．67阳糕绷胞分布予基底层；2．采用Dispase酶及腱蛋白酶消化法，用无血清角化细胞培养液，在无3T3细胞的条{牛下连续砖代培菸入正窜翻艟糖膜上皮绸黢，鲴照可传4-5代，存滋30—50天；培养细胞具有上皮细胞的典黧形态，角激自染色阳髋：细胞接种后第卜3天为静止生长期，第5-10天处于对数生长期，第12天后谶入平台期，倍增时间为24～48小薅；3．口腔粘膜上皮细胞及成纤维细胞均可在生物降解性材料支絮PGA上粘附艇长，MTT法检测发现细胞在支架上生长情况好于正常体外培养细胞。用PGA支架体{謇拜搀建基绞工程纯巨睡钱暌熬

6、实验研究中文接簧2上海第二医科大学博士学位论文(2004年)外构建的组织工程化人口腔粘膜含类似上皮层和固有层，但没有完整的基底膜，有些部位层次紊乱，缺乏弹性。结论：1．本实验建立了正常口腔粘膜上皮细胞无血清连续培养体系；2．口腔粘膜上皮细胞及成纤维细胞与PGA具有良好的生物相容性，PGA在短期内可以促进OKC及OFC的体外生长；3．用PGA和AlloDerm作为支架均可构建出含上皮和固有层的双层的组织工程化口腔粘膜，AlloDerm构建的组织工程化口腔粘膜形态学更接近正常口腔粘膜。关键词组织工程口腔粘膜角化细胞口腔粘膜成纤维细胞PGAAlloDerm无血清培

7、养体外构建纰织工程化口腔粘膜的实验研究中文摘要上海第二医科大学博士学位论文(2004年)英文摘要Experimentalstudyoninvitrooralmucosaengineeringusingtwokindsofseaffoids：PGAandAIIoDermAbstractobjeefivel。Toinvestigatethefeasibilityoforalmucosatissueengineeringinvitrousingtwokindsofscaffolds：PGAandA1loDernl．2．Tocomparethetwokindsofs

8、caffoldsintheprocessofcons