甘蓝型油菜cdna差减文库和均一化文库构建论文

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1、摘要油菜是我国主要的油料作物，大约有50％的食用植物油来源于油菜。长期以来，选育高产优质油菜一直是育种家所面临的主要任务。实践证明，杂种优势的利用是提高油菜产量的主要途径，而雄性不育是杂种优势利用的重要手段。隐性细胞核雄性不育因其具有不育性彻底、稳定、恢复源广等优点，在国内已经成为杂种优势利用的一个重要途径，但由于得不到100％的不育系，在杂交制种时需人工拔除不育系株行中50％的可育株，限制了其广泛应用。本研究以甘蓝型油菜双隐性细胞核雄性不育系S45AB为材料，利用抑制性差减杂交技术(SSH)构建了S45AB

2、小花蕾期的正反向差减文库。对差减文库进行质量检测表明其质量完好。藉此，可以通过反向Northern杂交技术筛选到育性相关基因，分析S45AB雄性不育机理，为更好地利用S45AB打下坚实的基础。另外，我们利用双链特异性核酸酶(duplex．specificnuclease，DSN)均一化方法构建了甘蓝型油菜华杂4号小花蕾的均一化文库。对均一化文库进行评价结果表明其均一化效果理想。利用这个文库，可以制备油菜基因芯片，来进行油菜功能基因组研究。关键词：甘蓝型油菜；隐性核不育；抑制性消减杂交；均一化cDNA文库；双链

3、特异性核酸酶4AbstractRapeseedisoneofthemajoroilseedcropsinChina．ItcontributestOappropriately50％ofthevegetableoilconsumption．Inthepastandthenearfuture，canolabreedersstillfacethecommonandmajorgoalofimprovingtheproducibilityofrapeseed．Toachievethis，heterosisutilizat

4、ionisprovedtObeaveryeffectivewayandmalesterilityisamongtheimportantmethods．Thegeniemalesterility(GMS)systemshadgreatpotentialforhybridseedproductioninvirtueofthecharacteristicsofcompleteandstablemalesterility,nonegativecytoplasmiceffectsonplantgrowth，andeas

5、eoftransferenceofthemalesterilitygene(s)todiversegeneticbackgrounds．However，theproductionofFlhybridseedrequirestheremovalof50％ofsegregatingfertileplantsinthesterilefemalelinewhichlimitsitsutilizationforproductionofhybridseed．Inthisresearch，aforwardandabackw

6、ardlibraries，whichwerehighlyenrichedformalefertility．relatedgenefragmentsofrecessivegeniemalesterility(RGMS)two‘typelinesS45ABlittlebuds，wereconstructedusingsuppressionsubtractivehybridization(SSH)．QualitycheckshowedthatqualityofsubtractivelibrariesWasgood．

7、Byreversenorthemblot，genesrelatedtOfertilityCanbescreenedandthenthemalesterilitymechanismofS45ABmaybeanalvsised．ItsetupconditionformewidelyutilizationofRGMSlineS45AB．Inaddition，anormalizedeDNAlibrarywasconstructedbyduplex—specificnuclease(DSN)withF1hybridiz

8、ationseedHuazaNo．4littlebuds(<3mm)．Thenormalizationefficiencyisverygood．GenechipcanbemadetOstudyfunctiongenomeofrapeseedwiththenormalizedcDNAlibrary．Keywords：Brassicanapus；recessivegeniemalesterility(R