高迁移率族蛋白1在内毒素耐受中的作用及其机制研究

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1、万方数据中图分类号UDCR644601博士学位论文学校代码!Q53三密级公开高迁移率族蛋白1在内毒素耐受中的作用及其机制研究TheroleofHighmobilitygroupProteininendotoxintoleranceanditsmechanism作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：李杉珊临床医学烧伤整形外科湘雅三医院罗成群答辩委员会主中南大学2013年4月学位论文原创性声明㈣峭万方数据本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人

2、已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：!至啦日期：一兰翌∑年』月立日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适

3、应本声明。作者签名：堡堕兰!日期：生年』月丑日导师签名钟’日期：遮!1年』月立日万方数据高迁移率族蛋白1在内毒素耐受中的作用及其机制研究摘要：背景：高迁移率族蛋白1(删GBl)生理状态下以非组蛋白的形式存在于细胞核中，可在炎症反应晚期释放至胞外发挥炎症因子的作用。外源性重组HMGBI可以引起内毒素耐受。内毒素耐受是机体抑制自身炎症反应过度发展的有效手段，表现为抑制TNF—Q等促炎因子的表达而并不抑制IL-IO等抑炎因子的表达。虽然内毒素耐受能在一定程度上抑制炎症反应的泛滥，但若任其发展，便会削弱机体的防御能力，增加二次感染甚至死亡的几率。目前有关内毒素耐受机制的

4、研究尚无定论，我们不知道该过程通过什么来介导，是否存在关键的启动因子。目的：研究经典内毒素耐受(小剂量LPS引起)的发生机制，说明内源性HMGBI在其中不可替代的独特作用，并阐明其机制。方法：课题分为四个部分。第一章，应用重组HMGBI或经热处理的重组HMGBI预处理小鼠1小时后，给予其大剂量LPS打击，ELISA检测血清中TNF—Q的含量，wB及免疫组织化学染色法检测肝脏中其中IRAK—M的表达；第二章，应用小剂量LPS预处理小鼠24小时后，给予其大剂量LPS打击，ELISA检测血清中HMGBI的含量，WB检测肝脏中HMGBI的表达；应用小剂量LPS预处理RA

5、W264．7细胞18小时后，给予其大剂量LPS打击，免疫荧光染色观察HMGBI的核一胞浆转移情况；第三章，应用小剂量LPS预处理小鼠，0．5，4和10小时后分别连续腹腔注射正丁酸钠，24小时后腹腔注射大剂量LPS，RT—PCR检测肝脏中TNG—QmRNA的表达，WB检测肝脏中HMGBI的表达，ELISA检测血清中TNF-Q的含量；第四章，应用小剂量LPS预处理小鼠，2，12，22小时后分别连续腹腔注射HMGBI中和抗体，24小时后腹腔注射大剂量LPS，ELISA检测血清中TNF-Q的含量，WB检测肝脏中IRAK—M的表达，wB检测NF-KB在肝脏胞核中的表达，E

6、MSA检测肝脏中NF—KB与DNA的结合能力。结果：第一章，重组HMGBI预处理l小时可以引起内毒素耐受，其机制与上调负性调控蛋白IRAK-M的表达有关，与混在其中的微量LPS无关；第二章：小剂量LPS预处理24小时可以引起内源性HMGBI表达及释放的增加；第三章，HMGBI抑制剂正丁酸钠可以抑制小剂量LPS引起的内毒素耐受；第四章，HMGBI中和抗体可以通过下调IRAK—M的表达，恢复NF—KB的活性来阻碍LPS引起的内毒素耐受现象。结论：小剂量LPS引起的内毒素耐受现象需要内源性HMGBl的参与，其机制与上调IRAK—M的表达，抑制NF—KB通路的活性有关。

7、图19幅，表10个，参考文献107篇IJ万方数据关键词：内毒素耐受；高迁移率族蛋白；IRAK—M：NF—KB；脓毒症分类号：R644；R631III万方数据TheroleofHighmobilitygroupprotein1inendotoxintoleranceanditsmechanismAbstract：Background：Higllmobilitygroupboxprotein1(HMGBl)，asanon-histoneproteinslocatedinnucleus．Itcouldbereleasedandplaysakeyroleintheint

8、racellularsi