贵州小型猪胆汁淤积性肝纤维化模型的建立

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1、贵州小型猪胆汁淤积性肝纤维化模型的建立摘要目的：通过结扎胆总管建立贵州小型猪的胆汁淤积性肝纤维化模型；观察模型动物的肝脏功能变化和肝组织病理学变化，检测Fas表达和细胞凋亡情况，对模型进行客观评价并初步探讨其纤维化发生发展的可能机制。方法：8头体重（12-15）kg的雌性贵州小型猪，3%戊巴比妥（1ml/kg）腹腔内注射麻醉，剖腹显露胆总管并游离，双线结扎胆总管，并于两线间离断胆总管，建立动物模型。分别于术前30min、术后7d、术后14d、术后28d采取血样，检测肝功能、血常规和凝血功能；在胆总管结

2、扎前、术后7d、术后14d、术后28d取肝组织活检行光镜和电镜检查；免疫组化检测Fas的表达情况，原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡情况。结果：8头猪均顺利完成胆总管结扎造模手术。1头于术后1周死于意外，其余7头均存活至术后4周。血清学检测显示：与术前相比谷草转移酶（AST）在术后7d即达到一个较高的值（394.2±24.8）U/L，与术前（49.8±6.9）U/L相比具有明显差异（P<0.01），并在随后呈逐步增加的趋势；谷丙转氨酶（ALT）在术后7d升高（65.0±1.6）U/L，与术前（4

3、6.35±1.4）U/L相比具有明显差异（P<0.01）；血清总蛋白、白蛋白在术后28d里缓慢下降，与术前相比有明显差异（P<0.01）；总胆红素（TBIL）和直接胆红素（DBIL）含量也从术后7d开始持续升高，分别为（111.4±11.0）μmol/L和（93.2±8.2）μmol/L，与术前分别为（3.1±1.7）μmol/L和（1.4±0.6）μmol/L相比有明显差异（P<0.01）；碱性磷酸酶（ALP）从术后7d即开始持续升高(599.3±64.0)U/L，与术前（161.5±21.4）U/

4、L相比有明显差异（P<0.01)；19白细胞（WBC）在术后7d即升高（30.0±5.7）×10/L，与术前（11.7±1.8）9×10/L相比差异明显（P<0.01），红细胞（RBC）与血红蛋白（HGB）在术后28d里缓慢下降，与术前相比有差异（P<0.05）；凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）及纤维蛋白原（DFbg）在术后28d里缓慢下降，与术前相比有明显差异（P<0.01）；HE染色见，手术后肝小叶结构逐渐破坏，小叶间纤维增生、排列紊乱。Masson染色结果，术后14d,7头猪中6头肝纤维

5、化为S1级，1头S2级，28d成活的7头猪肝纤维化均达S3级；电镜提示在术后7d，肝细胞内出现大量脂滴，粗面内质网消失，核周隙增宽，核膜皱缩，线粒体水肿；病理检测及免疫组化显示：在胆总管结扎术后14d，肝细胞凋亡增多，Fas表达增加，肝纤维化程度加重。结论：通过结扎贵州小型猪胆总管可成功建立胆汁淤积性肝纤维化模型；其肝纤维化的发生发展可能与Fas表达的增加，促进肝细胞凋亡有关。关键词：肝纤维化；胆汁淤积；猪；模型；细胞凋亡2Theestablishmentofporcinecholestaticliv

6、erfibrosismodelAbstract:Objective:ToestablishcholestaticliverfibrosismodelinGuizhouminiaturepigsbybileductligation.Toobservethechangesofliverfunctionandhistopathologyinthemodelanimals.DetectionofFasproteinexpressionandapoptosis,objectiveevaluationmodela

7、ndtoinvestigatethepossiblemechanismsoffibrosisdevelopment.Methods:EightfemaleGuizhouminiarurepigs,weighting12to15kg,wereselectedasexperimentanimals.3%pentobarbital(1ml/kg)wasinjectedintothebodyofpigbyintraperitonealanesthesia.Thecommonbileductwasreveale

8、dbylaparotomy.Thecommonbileductwasdoubleligatedandtransectedbetweenthetwolines.Theanimalmodelwasestablishedbythisway.Bloodsamplesweretakenrespectivelyatpreoperative30min,7thday,14thdayand28thdayaftertheoperationforliverfunctionte